双抗夹心ELISa的步骤是什么?

来源：学生作业帮编辑：拍题作业网作业帮分类：生物作业时间：2024/05/01 23:57:04

双抗夹心ELISa的步骤是什么?
有的原理上说是（1）单抗包被-抗原-酶标二抗-底物显色.但是我看论文上都是（2）单抗包被-抗原-二抗-酶标二抗-底物显色.请问到底是什么?本人对双抗夹心ELISA不太懂.

（1）单抗包被-抗原-酶标二抗-底物显色.
本法首先也是用特异性抗体包被于固相载体,经洗涤后加入含有抗原之待测样品,如待检样品中有相应抗原存在,即可与包被于固相载体上的特异性抗体结合,经保温孵育洗涤后,即可加入酶标记特异性抗体,再经孵育洗涤后,加底物显色进行测定,底物降解的量即为欲测抗原的量.
（2）单抗包被-抗原-二抗-酶标二抗-底物显色.(改良双抗体夹心法)
本法首先是将特异性抗体a包被于固相载体,经洗涤加入含有欲测抗原之待检样品.经孵育洗涤后再加一次未标记的特异性抗体b,而这次加入的抗体b于第一次包被于固相载体上的特异性抗体a对被测抗原来说都是特异性的,但不是用同种动物免疫制备的,否则可出现非特异性反应.经孵育洗涤后,再加酶标记抗b抗体,再经孵育洗涤后加底物显色进行测定.这种方法与双抗体夹心法不同之处是多加了一层抗体.因此,放大的倍数更高,故比双抗体夹心法更加灵敏.同时避免标记特异性抗体,而另一优点是只要标记一种抗抗体,即可达到多种应用.

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