western blot中,封闭液封闭完成后,需要用PBS或PBST洗涤滤膜,然后进行一抗孵育,在一抗孵育完成后为什么要

来源：学生作业帮编辑：拍题作业网作业帮分类：综合作业时间：2024/04/29 23:09:45

western blot中,封闭液封闭完成后,需要用PBS或PBST洗涤滤膜,然后进行一抗孵育,在一抗孵育完成后为什么要清洗滤膜上的磷酸盐,磷酸盐对后续的加入二抗有什么影响?
一抗孵育完成后，我是知道洗膜的，可是《分子克隆》上说要清洗掉磷酸盐与叠氮钠，清洗叠氮钠我知道为什么，可是不知道为什么要清洗掉磷酸盐，因为在网上有不少资料在洗膜过程中是不用换掉PBS的（因PBS中含有磷酸盐），可是《分子克隆》上说要在一抗孵育完成后用TBST洗滤膜，

一抗孵育完成后洗膜是为了洗掉未和膜结合的抗体,而不是磷酸盐.只有洗干净非特异性结合在膜上的一抗,加二抗时才不会因非特异结合而呈现很重的背景.至于是使用PBS(T)还是TBS(T),这要具体看你的二抗种类.PBS不适合AP系列,PBS/TBSS适合AP和HRP体系.另外,做磷酸化蛋白的WB,PBS不合适.

western blot 一抗孵育,为什么不可以将一抗和分析的蛋白样品一起先孵育,后page 电泳,这样更节约一抗? western封闭膜以后,不能马上孵育一抗,把膜放在4度环境下,2天, western blot一抗后放了封闭 western blot 中在转膜之后为什么要进行封闭啊?据说是为了防止抗体的非特异行结合,这里的非特异性结合指的是什么制片过程中,为什么要把滴有小鼠腹腔液的载玻片,在湿润的条件下37度孵育30min 在一个瓶子里放一半水,然后完全封闭,一万年后,瓶子内还是原来的样子么? Western blot 中脱脂奶粉封闭的是哪些蛋白?原理是什么? western blot的一抗和二抗是如何作用的? western blot加一抗前忘了封闭会有什么后果? western blot中选择什么厂家的一抗比较好,根据什么选择的? 在动物细胞培养中进行完成原代培养后为什么要进行传代培养? 有关RNA提取的问题用TRIZOL提取RNA时,为什么每次都要在冰上孵育一会,常温下不行吗?