作业帮谢谢您的热心回答!请问用通用引物扩增及通用引物测序,和我按文献所说的引物来扩增测序有什么不同?
来源：学生作业帮 编辑：拍题作业网作业帮 分类：综合作业 时间：2024/05/05 07:26:35
谢谢您的热心回答!请问用通用引物扩增及通用引物测序,和我按文献所说的引物来扩增测序有什么不同?
提取DNA后,用30pmol 引物264 (5' TGC ACA CAG GCC ACAAGG GA3',对应E.coli 16S rRNA 1046 至 1027),10 pmol 引物285(5' GAG AGT TTG ATC CTG GCT CAG3‘;对E.coli 16S rRNA 9 至 30)扩增相当于1Kb碱基.测序引物即上面的244,259.请问一：这样的测序设计,测得是单向还是双向?是测得整个扩增的1Kb,还是仅扩增的这两个测序引物之间的序列?请问二：用通用扩增引物及通用测序引物可以吗?有什么不同?
测序引物244：5’CCCACGCTGCCTCCCGTAG3’．
259：5’TTTCAGAACAACGCGACAA3．分别对应E．coli16SrRNA的361～341和609—590位置
提取DNA后,用30pmol 引物264 (5' TGC ACA CAG GCC ACAAGG GA3',对应E.coli 16S rRNA 1046 至 1027),10 pmol 引物285(5' GAG AGT TTG ATC CTG GCT CAG3‘;对E.coli 16S rRNA 9 至 30)扩增相当于1Kb碱基.测序引物即上面的244,259.请问一：这样的测序设计,测得是单向还是双向?是测得整个扩增的1Kb,还是仅扩增的这两个测序引物之间的序列?请问二：用通用扩增引物及通用测序引物可以吗?有什么不同?
测序引物244：5’CCCACGCTGCCTCCCGTAG3’．
259：5’TTTCAGAACAACGCGACAA3．分别对应E．coli16SrRNA的361～341和609—590位置
一、单向还是双向的话根据你的需求来决定,1K的话一个反应基本也能测出一大半呢（700-800bp左右）如果你想得到全部的序列,那建议你测双向并且用你的那个测序引物（244,259）这样的话测出来的序列是从中间往两边走,两头的序列应该能测全.而如果用你扩增的引物测的话是从两头往中间走,并且你这个有1K,这样测的话可能两头的序列会测不全.
二、引物的话用扩增和测序的都可以,只要你设计的扩增引物没有什么特殊结构、过长或过短一般用来测序都没什么大问题
再问： 没有大懂。一、就是用这个测序引物（244,259）测序，测的可能是这两引物之间的序列，也可能是测的是从中间往两边走，测全部序列？可以使单向也可以使双向？ 二、我问的不是用扩增或测序引物，而指的是很多文献上说用通用引物，那么用这个文献上的引物（264,285及244,259）与通用引物有什么不同？ 谢谢您的热心解释！
再答： 一、这两个引物从你给的位置来看，个人感觉应该一个是正向（244 361-341）的一个是反向（259 609-590）。测的话244出来的应该是从300bp到1000bp的序列，259出来的应该是从600bp到1bp的序列，即一个是往后走一个是往前走（一般来说两个引物应该一个是正向一个是反向，但不知道你那个244的位置为什么写的是从361到341） 二、通用引物和你这个区别就是在序列上的位置不一样，你可以在你扩出的序列上找下，如果包含通用引物，那用通用引物和你的引物测都是可以的。 通用引物一般就是说在载体插入位点两端的引物，一个是正向一个是反向的，这样当你把DNA片段插入后就可以用通用引物将插入的序列测出来。像有些你自己P出来的片段里可能没有通用那你就要自己设计引物去测序或者是你插入的片段大于1K而你又需要得到全部序列，这时候如果用通用引物测就无法测通，就需要你自己在去设计引物测序
二、引物的话用扩增和测序的都可以,只要你设计的扩增引物没有什么特殊结构、过长或过短一般用来测序都没什么大问题
再问： 没有大懂。一、就是用这个测序引物（244,259）测序，测的可能是这两引物之间的序列，也可能是测的是从中间往两边走，测全部序列？可以使单向也可以使双向？ 二、我问的不是用扩增或测序引物，而指的是很多文献上说用通用引物，那么用这个文献上的引物（264,285及244,259）与通用引物有什么不同？ 谢谢您的热心解释！
再答： 一、这两个引物从你给的位置来看，个人感觉应该一个是正向（244 361-341）的一个是反向（259 609-590）。测的话244出来的应该是从300bp到1000bp的序列，259出来的应该是从600bp到1bp的序列，即一个是往后走一个是往前走（一般来说两个引物应该一个是正向一个是反向，但不知道你那个244的位置为什么写的是从361到341） 二、通用引物和你这个区别就是在序列上的位置不一样，你可以在你扩出的序列上找下，如果包含通用引物，那用通用引物和你的引物测都是可以的。 通用引物一般就是说在载体插入位点两端的引物，一个是正向一个是反向的，这样当你把DNA片段插入后就可以用通用引物将插入的序列测出来。像有些你自己P出来的片段里可能没有通用那你就要自己设计引物去测序或者是你插入的片段大于1K而你又需要得到全部序列，这时候如果用通用引物测就无法测通，就需要你自己在去设计引物测序
测序结果怎么找不到我的扩增引物序列?
我做的是分子鉴定真菌,用的是通用引物ITS1和ITS4,pcr扩增后只有marker有条带,其他的都没有是什么原因.
关于通用测序引物的问题
S rDNA基因的V3区引物与16SrDNA 基因序列的扩增采用细菌通用引物之间有什么区别呢?
PCR扩增 正向引物,反向引物是什么?怎么结合的?
请问ISSR标记的引物是通用引物吗?本人要做披碱草属方面的ISSR标记,发我一些引物信息.
扩昆虫的COII基因,用的是通用引物.请问通用引物的含义是什么?是否适用于昆虫的通用引物就能适应于所有昆虫
PCR扩增时引物的位置
PCR扩增DNA的操作里 为什么要用引物?
PCR产物测序问题.我用简并引物扩增未知基因.设计了几对引物.都出现了目的条带.发现其中两对引物的产物长度比较长.因为我
高分~~急求!如果要用PCR扩增下列序列,请写出上游引物和下游引物的序列
请问您一个基因的全长已经克隆出来,怎样进行验证呢?从ATG和TGA设引物重新扩增,还是从非编区设引物呢