求安捷伦1260液相色谱 工作站的详细操作方法

求安捷伦1260液相色谱 工作站的详细操作方法

Agilent 1260 HPLC 操作规程

1 开机
1.1 打开电脑
1.2 打开液相色谱各个模块的电源
1.3 双击桌面“LC1260(Online)”,进入联机界面
1.4 排气：
1.4.1 手动旋开泵处冲洗阀（逆时针旋转约1圈）
1.4.2 右键单击“Pump”图标区域,选择“Method”选项,进入泵编辑画面,设
流速：5ml/min,点击“确定”；
1.4.3 右键单击“Pump” 图标区域,点击“Control”选项,选中“ON”,点击“确
定”,则系统开始冲洗,直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止（一般为5分钟）,切换通道继续冲洗,直到所有要用通道无气泡为止；
1.4.4 右键单击“Pump” 图标,点击“Method”选项,设流速：0ml/min,手动
旋紧冲洗阀；
1.4.5 右键单击“Pump”图标,点击“Method”选项,按照方法要求选择合适比例
的流动相,设流速：1.0ml/min；（不一定是1）
1.4.6 同理右键单击“Column Comp”,“DAD”图标,点击“Method”选项,按照
方法的要求设置温度,波长,点击“控制” 选项,“ON”打开柱温箱和检测器.
2 编辑方法
2.1 点击“Method”—— “Edit EntireMethod”开始编辑完整方法；
2.2 选中除“Data Analysis ”外的三项,进入下一选项卡,选择“Als”（自动进样）,点击“OK”,进入下一选项；
2.3 选择“Method”菜单下“Method Information”选项,在“Method Comments”中加入方法的信息（如：This is for test!）,选择“OK”,进入下一选项；
2.4 泵参数设定：右键单击“Pump”图标,点击“Method…”选项,设置“Flow”：如1.0ml/min；“Stop Time”：如10 min（该停止时间仅为做一个样品需要的时间）,按照要求选择合适比例的流动相配比,选择“OK”,进入下一选项；
2.5 自动进样器参数设定：右键单击“Sampler”图标,点击“Method”选项,选
择“Injection volume”,输入进样体积,选择“OK”,进入下一选项；
2.6 柱温箱参数设定：右键单击“Column Comp”,点击“Method”选项,设置“Left”温度（可设置温度范围：低于室温10℃-80℃）,一般“Left”和“Right”温度一致,选择“Combined”绑定即可,“Stop Time”选择“As Pump /Injector”,选择“OK”,进入下一选项；
2.7 UV检测器参数设定: 右击“DAD” ,点击“Method…”选项,下方的空白处输入所需的检测波长（可根据需要选择多个波长,最多可选8个波长）；“Stop Time”选择“As Pump /Injector”；“Spectrum” ——“Store”选项下,根据需要选择 “None”或“All（全波长扫描）”等选项,选择“OK”,进入下一选项；
2.8 编辑方法完毕,从“Method”菜单中,选中“Save Method As”,输入一方法
名,选择“OK”,保存方法成功.
3 单针进样
3.1 从“Run Control”菜单中,选择“Sample Information”选项,输入“Operator Name”；在“Data File”中选择“Path”和 “Prefix/Counter（文件命名）”设置“Prefix（一般设置为年月日）”和“Counter”；输入“Location（样品位置）”和“Sample Name”,选择“OK”,进入下一选项；
3.2 基线平稳后选择“Run Control”中的“Run Method”选项,开始进样.
4 序列进样
4.1 选择“Sequence”菜单下“ Sequence Table”选项,在“Confiqure Table”中选择需要选项,一般为“Vial(样品瓶)”,“Sample Name(样品名称)”,“Method Name(方法名称)”,“Inj/Vial（进样次数）”,“Sample Type（样品类型）”,“Datafile（文件名）”和“Inj Volume（进样体积）”；
4.2 点击“Inset”生成一行,设置上述参数,选中该行,点击“Copy”和“Paste”复制后修改相应参数,即生成序列表,选择“OK”,进入下一选项；
4.3 点击“Sequence”菜单下“ Sequence Parameters”选项,选择序列数据的“Path”（序列会自动生成以“序列名称－时间”为名称的文件夹保存数据）,数据建议选择 “Prefix/Counter”保存；在“Shutdown”选项下选中“Post-Sequence Command/Macro”,根据需要选择“PUMPALL OFF（序列结束后关闭泵）”” “LAMPALL OFF（序列结束后关闭紫外灯）”” “STANDBY（序列结束后关闭紫外灯和泵）”,选择“OK”,进入下一选项；
（注：若“Path”中默认保存于C盘,则可点击“View”,选择“Preferences”,根据需要添加相应的“SequenceTemplates”“Data”“Master Methods”保存路径）
4.4 从“Sequence”菜单,选中“Save Sequence Template As”,输入一序列名,选择“OK”,即可；
4.5 基线平稳后选择“Run Control”中的“Run Sequence”选项,开始序列进样.
（注：若中途停止运行,则选择“Run Control”中的“Stop Run/Inject/ Sequence”可保留图谱信息,若选择Abort,则所有图谱信息都丢失）
5 数据分析（脱机状态使用）
5.1 双击“LC1260（Offline）”图标进入的脱机画面
5.2 从“View”菜单中,点击“Data Analysis”进入数据分析画面
5.3 从“File”菜单选择“Load Signal”,选中所需的数据文件名,点击“OK”,则数据被调出.
5.4 谱图优化：从“Graphics”菜单中选择“Signal Options”.从“范围” 中选择“Full”或“Use Ranges” 选择所需“Time Range”和“Response Range”,选择“OK”；从“Integration”中选择“Integration Events”,调整“Area Reject”和“Height Reject”删除杂峰；点击“Set Integration”图标,可选择性消除不需要的积分,若想消除该操作,则选择“Method Manual Events”上排左起第5个图标进行移除操作即可,点击左边“√”图标,将积分参数存入方法并退出“Integration Events”.
（注：“Set Integration”图标为）
6 标准曲线绘制
6.1 选择“Calibration”菜单下“New Calibration Table”,选择“Automatic Setup”中“Level（即标曲中对应的点,第一个点即为1）”和“Defanlt Amount（标准品对应点的浓度）”,选择“OK”；
6.2 通过选择“Calibration”菜单下的“Add Level”选项依次添加各点参数,若为外标法,在“ISTD”项下选“NO”,若为内标法则选“Yes”；“#”项下对应标准品和内标无的数字的应统一；若想更改标准曲线中的对应点；
6.3 选择“Calibration”菜单下的“Recalibrate”项的“Mode”选项,选择“Average”则表示取当前点与标曲中对应点的平均值替代标曲中原对应点,若选择“Replace”则表示将当前点取代标曲中对应点；
（注：修改“Defanlt Amount”中浓度单位的方法：选择“Calibration”项下“Calibration Setting”,修改“Amount Units”,设置浓度单位；选择“Calibration”项下“Calibration Setting”,修改“Default CalibrationCurve”,选择合适的曲线类型-Type,是否过原点-Origin和各点对于标准曲线的比重-Weight,通常选Equal）
6.4 调出样品谱图,点击需要计算浓度的色谱峰,选择“Report” 菜单中的“Specify Report”,选择“Report style”为“Detail”,点击“OK”后选择“打印预览”图标,在报告中即可体现计算结果.
7 图谱重叠设置
7.1 选择“File”菜单下“Overlay Signal”选项,选择任意需要重叠的图谱；
7.2 在“Signal”选项下,选择“3D Signal Overlay”图标（紧邻图谱上方左起第四个图标）,在弹出的“Adjust Signal OverlayOptions”对话框中调节交错时间和高度；若想移除重叠谱图,点击第六个图标.
8 信噪比等参数计算
8.1 选择“Report”菜单中的“System Suitability”项下的“Edit Noise Range”选项,设置时间范围（超过1min）；
8.2 选择“Report” 菜单中的“Specify Report”,选择“Report style”为“Perfomance+Noise”,点击“OK”后,即可预览信噪比参数；
8.3 选择“Report” 菜单中的“Specify Report”,选择“Report style”为“Extended Perfomance”,点击“OK”后,即可预览对称性、拖尾因子等所有参数.
9 程序运行时检测出峰情况
选择“File”菜单下的“Snapshot”选项即可.
10 打印报告
10.1 从“Report”菜单中选择“Report Mode”,选择“Use Classic Reporting”；
10.2 从“Report”菜单中选择“打印报告”,则报告结果将被打印.
11 关机
11.1 冲洗色谱柱和系统后,退出化学工作站及其它窗口,关闭计算机；
11.2关闭Agilent 1260各模块电源开关.
仪器使用注意事项
1. 用棕色的溶剂瓶盛放水溶液或磷酸盐缓冲液.光照影响瓶中藻类的生长会堵塞溶剂过滤器,从而影响泵的运行.勿使用多日存放的蒸馏水.
2. 在比例阀的混合点,重力作用使盐颗粒沉淀下来,通常,下面阀A/D接水相/盐溶液,C/B接有机溶剂.使用盐时脱气机易堵,可将管路入口与出口反接,用60摄氏度的温水反冲,用针筒缓慢吸200mL左右.
3. 流动相瓶中的滤头脏.压力波动,可将滤头拔下,检查是否与滤头有关.滤头污染,可用30%-35%的稀硝酸泡1-2h或过夜,看污染程度,最后用水冲洗干净,重新装好.
4. seal-wash 用10%的异丙醇.使用缓冲盐时要加seal-wash选项,周期清洗.
5. LAN与CAN不能串联,LAN接仪器,PC.CAN为模块间通讯.
6. 柱温箱选择3uL,减少死体积,延迟体积.
7. 液相上各种灯颜色.电源打开后,四个模块左侧灯亮绿色.状态指示灯位于各自模块的右上方：呈黄色：该仪器在未准备好状态(Not-ready) 或正在自检.呈绿色：该仪器正在运行,采集数据(Run).无颜色：该仪器已准备好等待运行(Pre-run).呈红色：该仪器检测到有故障发生,仪器在错误状态,红色多发生于漏液时.
8. 过滤白头位于排气阀内,当系统压力有异常增高时,首先需要检查过滤白头是否阻塞了.判断的方法是：打开排气阀,以纯水作流动相,将流速设为5mL/min,如果泵压超过10bar,则说明过滤白头需要更换了.如果过滤芯的颜色发黑,说明是被柱塞密封垫磨损下来的碎屑堵塞的.
9. 毛细管线分类：0.17mm内径 ------绿色 ;0.12mm内径-------红；0.25mm内径-------蓝PEEK 管线：内径 -----0.18mm.
10. 灯能量测试,先将灯预热,用水平衡系统.启动Agilent Lab advisor 进行测试.启动软件 connect（界面右上部分） Service&Diagnostics（左侧导航栏） 选择G4212B Intensity Test Run 查看结果.
11. 柱子存放：柱子填充乙腈或甲醇,两端堵头封存,每一个月重新使用乙腈或甲醇,填充封存.