作业帮请问：怎样分离提纯微生物?
来源：学生作业帮 编辑：拍题作业网作业帮 分类：生物作业 时间：2024/05/22 00:03:15
请问：怎样分离提纯微生物?
请问：用显微镜观查微生物,因菌体是被染色的,但染色后的菌体是死的,如要分离活的纯一品种的微生物需怎样进行?请通俗、详细些的给予赐教.
请问：用显微镜观查微生物,因菌体是被染色的,但染色后的菌体是死的,如要分离活的纯一品种的微生物需怎样进行?请通俗、详细些的给予赐教.
1.稀释涂布平板法
(1) 倒平板 将肉膏蛋白胨琼脂培养基,高氏Ⅰ号琼脂培养基；马丁氏琼脂培养基加热溶化,待冷至55~60℃,高氏Ⅰ号琼脂培养基加入10%酚数滴,马丁氏琼脂培养基加入链霉素溶液.混匀后分别倒平板,每种培养基倒三皿；
(2) 制备土壤稀释溶液 称取土样10g,放入盛有90ml无菌水并带入玻璃珠的三角烧瓶,振动约20min,使土样与水分混合,将细胞分散.用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀,然后用无菌吸管从此试管中吸取1ml加入另一个盛有9ml无菌水的试管中,混合均匀,以此推制成10-1,10-2,10-3,10-4,10-5,10-6不同稀释的土壤溶液；
(3) 涂布 将上述每种培养基的三个平板地面分别用记号笔写上10-4,10-5,10-6三种稀释度,然后用无菌吸管分别由10-4,10-5,10-6三管土壤稀释液中各取0.1ml对号放入已写好室温下静置5~10min,使菌液吸附进培养基；
(4) 培养 将高氏Ⅰ号琼脂培养基平板;马丁氏琼脂培养基平板倒置于28℃温室中培养3~5day,肉膏蛋白胨平板倒置于37℃温室中培养2~3day；
(5) 挑菌落 将培养后长出的单个菌落分别挑取少许细胞接种到上述三种培养基的斜面上,分别置28℃和37℃温室培养,大菌苔长出后,检查其特征是否一致,同时将细胞涂片染色后用显微镜检查是为单一的微生物.若发现有杂菌,需要再一次进行分离、纯化,直到获得纯培养.
2.平板划线分离法
(1)倒平板 按稀释涂布平板倒平板,并用记号标明培养基名称,土样编号和实验日期；
(2) 划线 在近火焰处,左手拿皿底,右手拿接种环,挑取上述的土壤悬液一环在平板上划线.划线的方法很多,但无论采用那种方法,其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释,使之形成单个菌落；
(3) 挑菌落 同稀释涂布平板法,一直到分离的微生物认为纯化为止.
(1) 倒平板 将肉膏蛋白胨琼脂培养基,高氏Ⅰ号琼脂培养基；马丁氏琼脂培养基加热溶化,待冷至55~60℃,高氏Ⅰ号琼脂培养基加入10%酚数滴,马丁氏琼脂培养基加入链霉素溶液.混匀后分别倒平板,每种培养基倒三皿；
(2) 制备土壤稀释溶液 称取土样10g,放入盛有90ml无菌水并带入玻璃珠的三角烧瓶,振动约20min,使土样与水分混合,将细胞分散.用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀,然后用无菌吸管从此试管中吸取1ml加入另一个盛有9ml无菌水的试管中,混合均匀,以此推制成10-1,10-2,10-3,10-4,10-5,10-6不同稀释的土壤溶液；
(3) 涂布 将上述每种培养基的三个平板地面分别用记号笔写上10-4,10-5,10-6三种稀释度,然后用无菌吸管分别由10-4,10-5,10-6三管土壤稀释液中各取0.1ml对号放入已写好室温下静置5~10min,使菌液吸附进培养基；
(4) 培养 将高氏Ⅰ号琼脂培养基平板;马丁氏琼脂培养基平板倒置于28℃温室中培养3~5day,肉膏蛋白胨平板倒置于37℃温室中培养2~3day；
(5) 挑菌落 将培养后长出的单个菌落分别挑取少许细胞接种到上述三种培养基的斜面上,分别置28℃和37℃温室培养,大菌苔长出后,检查其特征是否一致,同时将细胞涂片染色后用显微镜检查是为单一的微生物.若发现有杂菌,需要再一次进行分离、纯化,直到获得纯培养.
2.平板划线分离法
(1)倒平板 按稀释涂布平板倒平板,并用记号标明培养基名称,土样编号和实验日期；
(2) 划线 在近火焰处,左手拿皿底,右手拿接种环,挑取上述的土壤悬液一环在平板上划线.划线的方法很多,但无论采用那种方法,其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释,使之形成单个菌落；
(3) 挑菌落 同稀释涂布平板法,一直到分离的微生物认为纯化为止.