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western杂交出现分子量大于和小于预期蛋白的条带'原因是什么啊'?

来源:学生作业帮 编辑:拍题作业网作业帮 分类:生物作业 时间:2024/05/23 02:10:53
western杂交出现分子量大于和小于预期蛋白的条带'原因是什么啊'?
实际上来说,Western并不能对蛋白质的分子量进行测定,它只是利用一抗二抗显色的步骤从凝胶上定性找到某一蛋白质.所以分子量大小还是在于电泳的过程.
首先,从电泳的原理上讲,它通过带电基团在电场中的移动来测定分子量,蛋白质的构象(空间形态)对这个影响很大,球蛋白就会比线形蛋白显的分子量小.而且marker同样有这个问题.
另外,对于western来说,多数都是从生物体中(细胞裂解液)做全蛋白电泳,然后特异性检测某一蛋白的存在,正因如此,蛋白质的一级结构就显的很重要了,毕竟你的预期蛋白是唯一的,而生物表达的蛋白可能就会存在或多或少的差异,分子量自然也就不会完全匹配预期.