大肠杆菌感受态细胞DNA转化,为什么没有克隆菌生长?
来源:学生作业帮 编辑:拍题作业网作业帮 分类:生物作业 时间:2024/03/29 03:31:40
大肠杆菌感受态细胞DNA转化,为什么没有克隆菌生长?
以下是我的步骤:
猪瘟疫苗216bp片段克隆
1、PMD-18T vector 1ul
216bp胶回收产物 4ul
2、加入5ul的SolutionⅠ
3、16℃连接过夜(大约20h)
感受态细胞的DNA转化:
1.制备好的感受态细胞从—70℃冰箱取出后在冰水混合物中融化10min
2.取100ul感受态细胞,置于1.5ml离心管中.
3.向感受态内加入5ul连接过夜的DNA,轻轻混匀后冰中放置30min.
4.42℃90s,立即入冰中2min.
5.加入1ml37℃的预温营养肉汤.
6.37℃,120r/min,1h培养.(在1.5ml里装着)
7.4000rpm,4℃,离心2min后,取出100ul涂于Amp板上.(Amp是按1/1000的量加入普琼上的).
8.过了18h 都没长.
以下是我的步骤:
猪瘟疫苗216bp片段克隆
1、PMD-18T vector 1ul
216bp胶回收产物 4ul
2、加入5ul的SolutionⅠ
3、16℃连接过夜(大约20h)
感受态细胞的DNA转化:
1.制备好的感受态细胞从—70℃冰箱取出后在冰水混合物中融化10min
2.取100ul感受态细胞,置于1.5ml离心管中.
3.向感受态内加入5ul连接过夜的DNA,轻轻混匀后冰中放置30min.
4.42℃90s,立即入冰中2min.
5.加入1ml37℃的预温营养肉汤.
6.37℃,120r/min,1h培养.(在1.5ml里装着)
7.4000rpm,4℃,离心2min后,取出100ul涂于Amp板上.(Amp是按1/1000的量加入普琼上的).
8.过了18h 都没长.
当然要先用液态不加抗生素的LB复苏好不好.
不要纠结在转化涂板的过程上 要么就是你的质粒酶切完后回收的片段不对 要么就是你的胶回收产物不对
再问: 我用我的胶回收产物重新跑电泳了,条带和Mark亮度差不多的,而且片段就是216bp,没有杂带。 所以不会是胶回收问题。
再答: 那质粒呢 可能切完回收的条带不对 反正应该是没连上的问题 不会是转化的问题 而且只是一次没长出来不是很正常的么
不要纠结在转化涂板的过程上 要么就是你的质粒酶切完后回收的片段不对 要么就是你的胶回收产物不对
再问: 我用我的胶回收产物重新跑电泳了,条带和Mark亮度差不多的,而且片段就是216bp,没有杂带。 所以不会是胶回收问题。
再答: 那质粒呢 可能切完回收的条带不对 反正应该是没连上的问题 不会是转化的问题 而且只是一次没长出来不是很正常的么
质粒DNA转化大肠杆菌感受态细胞再热激以后进行活化培养,这时培养基为什么不加入抗生素
大肠杆菌感受态细胞转化实验中没冰浴就热击会怎样?
大肠杆菌制备感受态细胞和重组子转化实验中,没有实验结果
大肠杆菌感受态细胞转化实验中冰浴的作用是什么?
转化实验中除了用大肠杆菌的感受态细胞还可以用哪种菌的感受态细胞?
大肠杆菌感受态细胞制备试验中为什么转化后要在37℃摇床上温育45min
谁有做过大肠杆菌感受态细胞
在做转化时,外源DNA与感受态细胞混匀后为什么要冰上放置30分钟后热激?
大肠杆菌在哪个生长时期最适合制备成感受态细胞?
表达型大肠杆菌BL21(DE3)PLySs感受态细胞转化培养
大肠杆菌感受态转化的原理是什么?
如何冻存大肠杆菌感受态细胞