GFP怎么转染细胞 本人新手,载体从哪来?质粒载体和病毒载体什么关系?
来源:学生作业帮 编辑:拍题作业网作业帮 分类:综合作业 时间:2024/04/29 17:32:05
GFP怎么转染细胞 本人新手,载体从哪来?质粒载体和病毒载体什么关系?
看这个,很详细了.
再问: 看不明白。。。最好那位精通的大哥留下qq,我问问。。
再答: 百度可以留言。
再问: 比如我要转gfp到小鼠的fibroblast,质粒和其他各种载体什么关系?我该选用什么载体?是买的还是自己构建的?又怎么能做到把gfp连接到载体上?最后又如何筛选?
再答: 你的gfp现在在什么上面?把质粒长出来,用酶切把gfp片段剪出来,然后放到载体里,用同样的酶就可以了。载体看你需要什么样的,看你需要配什么样子的启动子。可以买逆转录病毒载体或者别的都可以,通过化学方法(氯化钙或者lipofectamine)或者电击转到你要转的细胞里面去。筛选过程需要看你的载体,有的是带耐抗生素的标记的,可以在培养基里面加抗生素,有的是荧光的。如果你转的是GFP甚至不用抗生素,直接选绿色的细胞就好了,用流式细胞仪。
再问: gfp质粒是买的吗? 启动子那么多我怎么选? 用逆转录病毒的话直接侵染不行吗?最关键问题是这些发生的过程我都看不到。。。是根据结果推算的吗?
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再答: 你的gfp现在在什么上面?把质粒长出来,用酶切把gfp片段剪出来,然后放到载体里,用同样的酶就可以了。载体看你需要什么样的,看你需要配什么样子的启动子。可以买逆转录病毒载体或者别的都可以,通过化学方法(氯化钙或者lipofectamine)或者电击转到你要转的细胞里面去。筛选过程需要看你的载体,有的是带耐抗生素的标记的,可以在培养基里面加抗生素,有的是荧光的。如果你转的是GFP甚至不用抗生素,直接选绿色的细胞就好了,用流式细胞仪。
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