作业帮请问用TRIzol提取总RNA蛋白质除不尽的原因及解决办法?
来源：学生作业帮 编辑：拍题作业网作业帮 分类：生物作业 时间：2024/04/28 22:12:03
请问用TRIzol提取总RNA蛋白质除不尽的原因及解决办法?
这个是我提取的方法：
a）细胞或组织加入Trizol后（10cm2加1mlTrizol）,室温放置5分钟,使之充分裂解.
b）12000转离心5分钟,弃掉沉淀.
c）按照200µl氯仿每毫升Trizol的比例加入氯仿,涡旋混匀后在室温放置15分钟.
d）4℃,12000转离心15分钟.
e）将上层水相吸出,至另一个离心管中,注意,千万不要息道中间的界面；如果DNA和蛋白要同时提取,要保留下层酚相.
f）按照每毫升Trizol一毫升75%乙醇的比例,涡旋震荡离心管,悬浮沉淀.
g）4℃,12000转离心15分钟.弃上清.
h）室温晾干.注意：RNA样品不能凉得过干,这样的话很难溶解.
i）用合适量的去离子水或者TE缓冲液回溶RNA.注意：这里提到的水和TE都需要用DEPC水处理,并且高温高压灭菌.
j）测定RNA的OD值,定量RNA的浓度.
提取时氯仿用的是“电子清洁剂”,然后掉了异丙醇沉淀
不过老板说这都不是问题
这个是我提取的方法：
a）细胞或组织加入Trizol后（10cm2加1mlTrizol）,室温放置5分钟,使之充分裂解.
b）12000转离心5分钟,弃掉沉淀.
c）按照200µl氯仿每毫升Trizol的比例加入氯仿,涡旋混匀后在室温放置15分钟.
d）4℃,12000转离心15分钟.
e）将上层水相吸出,至另一个离心管中,注意,千万不要息道中间的界面；如果DNA和蛋白要同时提取,要保留下层酚相.
f）按照每毫升Trizol一毫升75%乙醇的比例,涡旋震荡离心管,悬浮沉淀.
g）4℃,12000转离心15分钟.弃上清.
h）室温晾干.注意：RNA样品不能凉得过干,这样的话很难溶解.
i）用合适量的去离子水或者TE缓冲液回溶RNA.注意：这里提到的水和TE都需要用DEPC水处理,并且高温高压灭菌.
j）测定RNA的OD值,定量RNA的浓度.
提取时氯仿用的是“电子清洁剂”,然后掉了异丙醇沉淀
不过老板说这都不是问题
1、室温放置5分钟是不可能使之充分裂解的,要充分振荡10-15s；
2、显然是DNA污染,蛋白不会跟RNA同时显色吧,这张图上有你也看不到.
2、显然是DNA污染,蛋白不会跟RNA同时显色吧,这张图上有你也看不到.
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