作业帮怎样储存纯化蛋白质,4摄氏度和零下20度哪一种能长时间保存蛋白质活性?
来源：学生作业帮 编辑：拍题作业网作业帮 分类：综合作业 时间：2024/05/18 17:52:40
怎样储存纯化蛋白质,4摄氏度和零下20度哪一种能长时间保存蛋白质活性?
在一个老美的实验室打工,做的是病毒DNA在细菌内扩增后的蛋白质提纯.通常是用尿素提纯完以后,应该用什么温度储存更合适?
在一个老美的实验室打工,做的是病毒DNA在细菌内扩增后的蛋白质提纯.通常是用尿素提纯完以后,应该用什么温度储存更合适?
尿素提纯?你做refold?纯化的蛋白应该液氮或者干冰乙醇速冻,然后置于-80 freezer.4度肯定不适合长期保存,而蛋白保存应该速冻,减少蛋白在慢速温度变化过程中的构象改变.-20也不足以维持蛋白的构象.
再问： 谢谢！关于液氮和干冰乙醇速冻有具体的方法吗，最好是有文献支持。
再答： 这个做生物物理的人都知道。当你研究一个蛋白的“温度--比热容”变化曲线，会发现即使在4度到20度的缓慢变化中，蛋白的热容还是会有改变，反映出来就是熵值会改变，这就表明蛋白的构象会发生变化，从而可能发生变性，失活，蛋白构象不均一等问题。因此速冻是为了让蛋白的构象来不及改变，而保存于-80也会使蛋白基本保持稳定。当然对于做蛋白晶体学的来说，最理想的是用新鲜纯化的蛋白。对于加甘油保持蛋白稳定性的办法在activity assay里无可厚非，记住做对照就行，对于晶体学来说，甘油是cryoprotectant，不利于长晶体。解决洗脱困难，你可以在buffer里加入少量甘油，然后在承接elution的容器中预先加入甘油，这个也是有很多不稳定的酶是这么纯化的，比如TEV，容易aggregate，就是这么处理。 另外，怕4度保存长菌降解的话，可以用0.2um的膜过滤除菌，或者在elute buffer里加sodium azide。但是只能保存较短的时间，平均两三天就是上限了。 你老板为啥这种常识都要文献支持，老板是做生物的不？ 先回答这么多，有问题可以追问。
再问： 谢谢！关于液氮和干冰乙醇速冻有具体的方法吗，最好是有文献支持。
再答： 这个做生物物理的人都知道。当你研究一个蛋白的“温度--比热容”变化曲线，会发现即使在4度到20度的缓慢变化中，蛋白的热容还是会有改变，反映出来就是熵值会改变，这就表明蛋白的构象会发生变化，从而可能发生变性，失活，蛋白构象不均一等问题。因此速冻是为了让蛋白的构象来不及改变，而保存于-80也会使蛋白基本保持稳定。当然对于做蛋白晶体学的来说，最理想的是用新鲜纯化的蛋白。对于加甘油保持蛋白稳定性的办法在activity assay里无可厚非，记住做对照就行，对于晶体学来说，甘油是cryoprotectant，不利于长晶体。解决洗脱困难，你可以在buffer里加入少量甘油，然后在承接elution的容器中预先加入甘油，这个也是有很多不稳定的酶是这么纯化的，比如TEV，容易aggregate，就是这么处理。 另外，怕4度保存长菌降解的话，可以用0.2um的膜过滤除菌，或者在elute buffer里加sodium azide。但是只能保存较短的时间，平均两三天就是上限了。 你老板为啥这种常识都要文献支持，老板是做生物的不？ 先回答这么多，有问题可以追问。