如何从cdna文库提取目的基因
来源:学生作业帮 编辑:拍题作业网作业帮 分类:生物作业 时间:2024/05/19 18:20:01
如何从cdna文库提取目的基因
为什么提取的时候要用一段核苷酸链?
为什么提取的时候要用一段核苷酸链?
PCR技术是DNA扩增技术,它能在比较短的时间内产生大量的DNA.在获取目的基因后才使用PCR技术.
获得目的基因的方法:
一、构建基因文库
提取总DNA.
用限制性内切酶将总DNA切成小片段,连到质粒或噬菌体载体上,把这些质粒转化到细菌,随着细菌繁殖而复制,这个过程又称为基因克隆(gene clone)
将总DNA包含的基因组各片段分别克隆在质粒或噬菌体载体上,便构成了该生物的基因文库(gene library).
二、反转录人工合成互补DNA
细胞核中转录的mRNA,已经加工去除内含子,只有外显子(编码蛋白质的序列),比构建基因文库优越,因此,先从细胞中提取所需的mRNA.
以mRNA为模板,在逆转录酶的作用下,合成互补的DNA片段(complementary DNA,cDNA),在逆转录完成时,mRNA被降解.在大肠杆菌DNA聚合酶I的Klenow片段的作用下,再以第一条DNA为模板,合成另一条互补DNA链.
优点 在细胞分化各阶段细胞往往转录出特异的编码特殊蛋白质的mRNA.因此,用cDNA方法获取的DNA片段往往是具有特定功能的目的基因.
获得目的基因的方法:
一、构建基因文库
提取总DNA.
用限制性内切酶将总DNA切成小片段,连到质粒或噬菌体载体上,把这些质粒转化到细菌,随着细菌繁殖而复制,这个过程又称为基因克隆(gene clone)
将总DNA包含的基因组各片段分别克隆在质粒或噬菌体载体上,便构成了该生物的基因文库(gene library).
二、反转录人工合成互补DNA
细胞核中转录的mRNA,已经加工去除内含子,只有外显子(编码蛋白质的序列),比构建基因文库优越,因此,先从细胞中提取所需的mRNA.
以mRNA为模板,在逆转录酶的作用下,合成互补的DNA片段(complementary DNA,cDNA),在逆转录完成时,mRNA被降解.在大肠杆菌DNA聚合酶I的Klenow片段的作用下,再以第一条DNA为模板,合成另一条互补DNA链.
优点 在细胞分化各阶段细胞往往转录出特异的编码特殊蛋白质的mRNA.因此,用cDNA方法获取的DNA片段往往是具有特定功能的目的基因.
为什么从基因组文库中提取目的基因和从CDNA文库中提取目的基因可以使用同一种探针?
从CDNA文库和基因组文库中钓出的目的基因有什么不同
怎样从基因文库中提取目的基因
用从基因组文库中提取的目的基因做探针(含内含子)能与用同一目的基因逆转录转录出的cDNA无内含子杂交吗
如何从基因文库中获取目的基因?
如何从基因文库中调取目的基因
如何从基因文库中筛选目的基因
为什么要构建基因文库 直接从含有目的基因的生物中提取不行吗
为什么要构建基因文库?直接从含有目的基因的生物体内提取不行吗?
为什么要构建基因文库而不是直接从含目的基因的生物体内提取
为什么要建立基因文库,直接从含目的基因的生物体内提取不行吗?
获取目的基因的方法有多种,下列不属于目的基因的获取方法的是 A从基因组文库中获取 B从cDNA文库中获取