作业帮为什么原核mRNA难分离纯化
来源：学生作业帮 编辑：拍题作业网作业帮 分类：生物作业 时间：2024/04/27 14:52:36
为什么原核mRNA难分离纯化
1.含量少
细菌的总RNA包括：前体RNA、小分子RNA、rRNA(包括16SrRNA、23SrRNA、5SrRNA)、tRNA和mRNA.其中,mRNA所占比例很小.例如,在大肠杆菌细胞中,mRNA仅占总RNA的4％,而tRNA和rRNA则分别占15％和80％.并且,mRNA群体在物理特性上不均一,大小从数百至数千碱基不等,核苷酸序列也各不相同.
2.半衰期短
绝大多数细菌mRNA的半衰期仅有数分钟.因为,细菌mRNA的转录和翻译不仅发生在同一细胞空间,而且这两个过程几乎是同时进行的.基因转录一旦开始,核糖体马上启动蛋白质合成,而mRNA的降解紧随着蛋白质翻译过程发生.这就是说,一个mRNA的5’端可能已经开始降解,而其3’部分仍在合成或被翻译中.
3.绝大多数细菌3’端无poly(A)序列
我们知道,真核细胞的mRNA与rRNA和tRNA不同,其3’端有poly(A)尾巴.poly(A)的存在不仅大大提高了mRNA的稳定性,而且应用这一特性和亲和层析原理,用填充有oligo-dT纤维素的层析柱可以纯化mRNA.然而,绝大多数细菌的mRNA不具有poly(A)尾巴.尽管少数细菌的3’端有poly(A)序列,但此序列极不稳定,常被看作是mRNA降解的标志.
正是由于细菌mRNA具有以上特点,使得mRNA在众多tRNA和rRNA存在的情况下难以分离和选择性标记mRNA.
细菌的总RNA包括：前体RNA、小分子RNA、rRNA(包括16SrRNA、23SrRNA、5SrRNA)、tRNA和mRNA.其中,mRNA所占比例很小.例如,在大肠杆菌细胞中,mRNA仅占总RNA的4％,而tRNA和rRNA则分别占15％和80％.并且,mRNA群体在物理特性上不均一,大小从数百至数千碱基不等,核苷酸序列也各不相同.
2.半衰期短
绝大多数细菌mRNA的半衰期仅有数分钟.因为,细菌mRNA的转录和翻译不仅发生在同一细胞空间,而且这两个过程几乎是同时进行的.基因转录一旦开始,核糖体马上启动蛋白质合成,而mRNA的降解紧随着蛋白质翻译过程发生.这就是说,一个mRNA的5’端可能已经开始降解,而其3’部分仍在合成或被翻译中.
3.绝大多数细菌3’端无poly(A)序列
我们知道,真核细胞的mRNA与rRNA和tRNA不同,其3’端有poly(A)尾巴.poly(A)的存在不仅大大提高了mRNA的稳定性,而且应用这一特性和亲和层析原理,用填充有oligo-dT纤维素的层析柱可以纯化mRNA.然而,绝大多数细菌的mRNA不具有poly(A)尾巴.尽管少数细菌的3’端有poly(A)序列,但此序列极不稳定,常被看作是mRNA降解的标志.
正是由于细菌mRNA具有以上特点,使得mRNA在众多tRNA和rRNA存在的情况下难以分离和选择性标记mRNA.