某同学用滤纸片法定性测定抗生素的抗菌特性,发现出现的抑菌圈形状不规则,请问产生这种现象的原因.请大家帮他换一种抑菌试验方

某同学用滤纸片法定性测定抗生素的抗菌特性,发现出现的抑菌圈形状不规则,请问产生这种现象的原因.请大家帮他换一种抑菌试验方法,并简述过程.

不规则的原因如下
1,纸片取出后须放室温10min后方可打开 ,否则空气中的水份冷凝在纸片上易潮解 ,使药物失效影响药敏试验结果.
2,应用直径90cm平皿 ,在水平的无菌台上倾倒 ,准确量取高压灭菌后的M2H琼脂液25ml ,使之琼脂板厚度为 4mm.否则厚度过高 ,使含药物纸片的药物半球形扩散的体积加大 ,导致假耐药;反之导致假敏感.
3　将菌制成菌悬液用无菌棉签蘸取菌液在管壁上挤去多余菌液 ,涂布整个M2H平板表面 ,反复 3 次 ,每次将平板旋转60 度 ,保证涂布均匀 ,35 ℃培养后菌落呈半融合状态 ,否则影响药敏结果.
其他方法
E试验（E-test）
　　E试验是指浓度梯度琼脂扩散试验,其原理基本同扩散法,即浓度呈连续梯度的抗菌药物从塑料试条中向琼脂中扩散,在试条周围抑菌浓度范围内受试菌的生长被抑制,从而形成透明的抑菌圈.E试验综合了稀释法和扩散法的原理和特点,同时还弥补了二者的一些不足,可以像稀释法一样直接定量测出抗菌药物对受试菌的MIC.
培养基、菌液制备和接种
　　3.1.培养基、菌液制备和接种 同纸片扩散法.
贴E试验条
　　3.2.贴E试验条 同纸片扩散法,E试验条的刻度面朝上,不得贴反,一旦接触琼脂后不得再移动.直径150mm的平皿内可放置6根E试验试条,90mm者一般只能放置1根.
孵育时间和温度
　　3.3.孵育时间和温度 同纸片扩散法.
孵育后围绕试条可形成一个椭圆形的抑菌圈,在抑菌圈和试条的横切相交处试条上的读数刻度即是测定抗菌药物对受试菌的MIC.阅读时应注意的问题见供应商的产品说明书
微量肉汤稀释法
抗菌药物和培养基制备
　　1.2.1.抗菌药物和培养基制备 同常量肉汤稀释法.
MIC板制备
　　1.2.2.MIC板制备 无菌操作,将倍比稀释后不同浓度的抗菌药物溶液分别加到灭菌的96孔聚苯乙烯板中,第1至第11孔加药液,每孔10μl,第12孔不加药作为生长对照,冰冻干燥后密封,-20℃以下保存备用.
接种物制备
　　1.2.3.接种物制备 将用生长法或直接菌悬液法制备的浓度相当于0.5麦氏比浊标准的菌悬液,经MH肉汤1∶1000稀释后,向每孔中加100μl,密封后置35℃普通空气孵箱中,孵育16~20h判断结果.当试验嗜血杆菌属,链球菌属时,孵育时间为20~24h,试验葡萄球菌和肠球菌对苯唑西林和万古霉素的药敏试验时孵育时间必须满24h.此时,第1孔至第11孔药物浓度分别为128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125μg/ml.
结果判断
　　1.2.4.结果判断 以在小孔内完全抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC.当阳性对照孔（即不含抗生素）内细菌明显生长试验才有意义.当在微量肉汤稀释法出现单一的跳孔时,应记录抑制细菌生长的最高药物浓度.如出现多处跳孔,则不应报告结果,需重复试验.通常对革兰阴性杆菌而言,微量肉汤稀释法测得的MIC与常量肉汤稀释法测得的结果相同或低一个稀释度（1孔或2倍）.
不好意思 速度有些慢