作业帮QPCR引物设计要在CDS区吗
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/01 00:01:46
不需要只要你扩增出来的包含了该基因的完整CDS序列上面有起始密码子和终止密码子再问：多谢你的回答。我没有表达清楚我的意思。我是从一段基因上118-600碱基的位置，扩增目的基因，这一段基因没有起始密码
Oligodt不需要设计,用试剂盒里面的就行.如果你RT的引物想用自己的,那你需要扩增的基因序列应该是明确的吧.RT的时候'引物没太多的选择性,mRNA序列跟反义链配对,因此RT的引物要根据正义链（就
完全可以,PCR长度从50bp到数百都可以,不止局限于150-300个碱基对.楼上说的有道理,但是有一点要注意,最好计算一下扩增片段的Tm值,这样做溶解曲线的时候,光有一个峰还不够,而且得到的TM和你
这是针对逆转录pcr而言,所谓的跨外显子就是一个引物（比如上游引物）、出现在两个外显子交界,那么做RT-PCR时,dna由于2个外显子被内含子隔开,引物就不会起作用了
用PP5.0或oligo软件.网上有很多说明书的,操作十分简单再问：等于白说
只能两头设计你不知道基因名字么实在不行拿序列去BLAST上比对下也能知道它前后是啥啦
你设计出来以后,BLAST一下,扩增是特异的,接着就像一般的real-timepcr一样做的行了,不需要上游引物高一点.引物的Tm值要求和你用的哪个公司的酶和你用的哪个仪器有关.
构建载体需要酶切的,所以需要加接头的!
楼主说的是扩增子,即两引物目标位点之间的序列长度.PCR过程中,扩增就跟修路一样,越长越费工.在能够保证特异性的情况下,当然是越短越有效率,100-200bp就是综合两方面的考虑而建议的最佳扩增子长度
ATCG.原理就是体外环境模仿人体内环境,完成人体内的DNA复制,大概就这样.
就问题本身而言,引物合成回来是固体粉末,你把它溶于水中,再做一步变性退火就行了（不过由于是hairpin,形成二聚体的可能性也很大,这个似乎不可避免）.另外我不太明白为什么要用hairpin的引物?在
一条引物应该与A链一端的序列一致；令一条引物应该与B链在令一端的序列一致.走向应该都是从5’到3‘向基因内部走.
一般要20个碱基的长度,一对,要防止形成发夹.
cDNA和mRNA的序列是互补的,如果用两个引物,最后的两条DNA序列分别对应于mRNA和cDNA中的一段.由于引物方向从5‘至3’,所以两个引物对应于mRNA和cDNA中相应序列即可.
用primerpremie
是从NCBI里面的序列库中搜索的,自动搜索符合筛选条件的序列,从而给出引物序列blast是要求NCBI里面有的序列才能验证.你研究的物种基因组测序结果发布了吗?如果发布了的话就不用担心序列不全了
首先查道你的基因序列（NCBI搜）,第二查引物设计原则,第三下载个引物设计软件设计,简单好用的有primerpremier5.0,这些都能在网上搜到,软件用法也能搜到.
一般对于已知序列的PCR当然不要从保守序列来设计引物,只要从开放可读框前后开始设计就行了.需要从保守序列设计引物的情况一般是两种,一是某个物种里面某个特定基因序列从未被分离过,但其进化关系相近的物种有
一般使用primer5就挺好,不知道你是扩基因还是启动子,基因是否是已知.PCR引物设计原理:PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列.因此,引物的优劣直接关
引物种类多了,看你设计哪种引物了.如果你想在基因组或者cDNA上P一个基因,这个基因在物种上是一个家族,你肯定就要和本物种内其他家族成员进行比较,避开保守区,以免设计的引物P到那些基因.你要是想尽可能