酶切引物反向引物
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/04/27 22:31:46
同楼上,当初我问老师这个问题时,他说大学才学这么深
正反向引物就是一个引物是从3端开始,另一个是从5端开始的.看分子生物学的书吧,里面有详细介绍DNA复制的啊,就是那些理论而已.解释的太简单了,我做过pcr扩增的实验,不懂得可以问我,我尽量回答.
不好意思,我没设计过引物,不过建议你到生物秀或是小木虫的论坛去看看,那里有很多这样的问题的
首先要看目的基因中是否含有该酶切位点,只有没有的才可以选.其次,如果需要做表达,需要考虑起始密码子,防止移码突变;第三要考虑标签用于后面的蛋白纯化.如果仅仅用来拿到目的基因,那只需要第一点即可再问:我
可以这样来说吧,首先你应该有一条已知的序列,反向引物设计时在序列的5'方向找一段序列然后反向互补作为反向引物,在3'方向直接找一段序列作为正向引物.这样就OK了,这是引物的设计,至于其他条件可以参考相
引物,是一小段单链DNA或RNA,作为DNA复制的起始点,在核酸合成反应时,作为每个多核苷酸链进行延伸的出发点而起作用的多核苷酸链,在引物的3′-OH上,核苷酸以二酯链形式进行合成,因此引物的3′-O
在聚合作用的起始时,可以刺激合成另一种大分子,并与反应物以共价键形式连接的序列.在核酸化学中,引物是一段短的单链RNA或DNA片段,可结合在核酸链上与之互补的区域,其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点,
用PP5.0或oligo软件.网上有很多说明书的,操作十分简单再问:等于白说
关键就是这个引物的设计,如果你能设计好并且成功RT-PCR,那就没问题了.
DNA的合成必须3-OH,也就是说核苷酸必须要连接在3-OH上才能够合成延伸RNA引物就是提供3-OH的作用.而RNA的合成不需3-OH,所以引物用RNA比较好.事实上,只要是能提供3-OH的核苷酸,
你去找各大公司的产品手册,上面会有非常详细的随机引物的序列,随机引物非常的多,有上百种
正向引物和反向引物是相对的通常以一个双链DNA(上面的那条链)的上游结合部位称为正向引物是从左到右的方向,也就是5-3的方向而下面那条互补链的下游结合部位称为反向引物其方向是从右到左的因为下面的链的方
酶切位点多数时候是反向回文结构,因此你看到的正向序列与反向互补序列是相同的,所以在两个方向的引物上看,酶切位点序列完全一样.
一定要的.正向引物:5'.CTTCGAAATTC3'反向引物:5'.CCGATCGGGAGA3'回答楼主的补充问题:设计正向引物时,该引物序列应该具有和你待扩增DNA序列接近5‘段处的序列.反向引物设
一般要20个碱基的长度,一对,要防止形成发夹.
随机引物PCR如果是RAPD的话,是要用单引物的一般是10bp大小的,CG含量要高于60%.
用primerpremie
是从NCBI里面的序列库中搜索的,自动搜索符合筛选条件的序列,从而给出引物序列blast是要求NCBI里面有的序列才能验证.你研究的物种基因组测序结果发布了吗?如果发布了的话就不用担心序列不全了
首先查道你的基因序列(NCBI搜),第二查引物设计原则,第三下载个引物设计软件设计,简单好用的有primerpremier5.0,这些都能在网上搜到,软件用法也能搜到.
没事,这个可以,你应该是把设计的上下游引物都进行了比对,前两个比对结果应该就是上游、和下游引物,假设你第一个结果是上游,第二个结果是下游.那么第三个结果也就是下游比对结果,下游结合的位置距离上游、下游