转膜出来条带歪了

只要制备胶等过程都没问题,marker也跑出条带了,那这种情况最有可能的原因还是质粒的浓度过低.所以,虽然OD值可测出来,但胶显示不出来,我就遇到过这样的情况,还算很普通的现象.下次再加大菌量就行.再

600是多在中间,还是加在一头?其他的序列还一样吗?说具体一些如果是在中间,扩增的是cDNA的话,有可能是mRNA的alternativesplicing

一般Marker中亮的条带是100ng,其他的条带是50ng.可以看到你回收之后的条带亮度估计在10ng~30ng左右,如果你的上样体积为10ul,则浓度应该是1ng~3ng/ul,这个浓度是很低的,

不排除是预染Marker质量又问题再问：marker没有问题，实验室其他人做实验就没有问题。因为我是独立出来的，所以实验过程和仪器与他们不是很相同再答：那建议你在适当延长一下转膜的时间吧，三、四个小时

一片亮,一般是样品处理或者配胶的时候不注意,混入了一些内切酶,或是电泳温度高,导致核酸降解,尤其是跑RNA电泳,很容易这样.建议用新胶,新TBC（TAC）重新跑一次,样品用醋酸铵重新纯化,电泳槽用缓冲

1、内参没有被扩增出来2、电泳时内参没加loadingbuffer或染料

正常条件下28S亮度为18S的2倍,如果18S亮说明存在降解（因为28S比18S容易降解）,后面的实验就要慎重考虑是否继续.

因为这两种RNA的相对含量啊亲.那两条带一条在3.8kb,一条在2kb,都是rRNA的一部分,本来的相对含量大概就是1:2.另外,要达到这两条带1:2的比值比较难,只要最下面弥散的带不多质量就还可以,

1.河海-青蛙2.银玉-蝴蝶3.天申-家猫4.合同-鸽子5.占魁-鲤鱼6.天良-黄鳝7.江祠-飞龙8.青云-仙鹤9.汉云-牛10.光明-马11.贵妃-螺蛳12.有利-大象

可能还是转膜的条件问题吧,我和你的抗体一样,蛮好用的,你试试摸索转膜时间吧,可以一个样品多点几个孔,隔段时间就剪一条,摸摸时间

非特异性扩增优化下pcr条件在不行的话就重新设计引物

有很多影响因素：模板浓度,引物浓度,酶在反应过程中的不断消耗,循环数和温度等等.如果你已经P出来目的片段的话温度应该是适合的,可以加大模板和引物的量,建议回收片段后作为模板再P,这样得到的片段会较亮.

重新设计引物,把酶切位点给换掉.这是最保险也是最简单的方法.还有一种就是半酶切方法,做一个test,减少酶量,缩短酶切时间,这样就会有几种情况出现,至少会出现你需要的片段,这就要你去找合适的酶量和酶切

我之前跑PCR也是1···我个人觉得你应该先从引物考虑虽然PCR受很多因素的影响但是引物和退火温度无疑是很重要的两个方面没出现引物二聚体只能说你设计的两端的引物没有错配啊等等你可以找有经验的师兄师姐帮

这要具体分析.一种可能是你的PCR产物是非特异性片段,所以长度不一,这可以通过和你预期PCR产物的长度进行比较来判断.另一种可能是该基因在不同情况下有不同的剪接模式（alternativesplici

这就是特异性不好,建议做如下改进：1,控制好RNA提取过程,尽量减少RNA降解和基因组DNA的混入；2,严重怀疑你的模板量过高,把模板稀释10-1000倍的梯度试试；3,做二阶段温度pcr,先用稍高退

做一下考马斯亮蓝染胶看是不是全部转完了.照您的描述,应该是转上了,可能是有点过.也可以做一下丽春红染膜,确认看看是不是转上了.同意黑皮地雷的说法,Marker很容易转上的.

转膜有问题吗?转膜时那些条带有气泡产生吗?请问你做了这些样品对应的actin内参了吗?丽春红染色显示的条带怎样?若内参没问题,是不是你加底物没有弄均匀?你的一抗和二抗什么条件?

我不了解你的实际情况,我给你几条建议：1.可能是内参引物有问题2.你扩增内参基因的PCR条件设计可能有问题,如Tm3.你用的是一块胶吗?加核酸染料了吗?

1退火温度不合适2引物不合适3模板有问题4酶由问题