蛋白量差多少western能检测到
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/04/29 18:14:26
注:本资源来源于网络.(1)通常如果使用Bio-Rad的标准湿式转膜装置,可以设定转膜电流为300-400mA,转膜时间为30-60)分钟.也可以在15-20mA转膜过夜.转膜时也可以使用碧云天的多功
这个还真没有但有个蛋白数据库Swiss-Prot
只看marker也不可靠吧?还是用ponseauS(丽春红)给膜上的蛋白质显色看一下到底如何.另外膜上没有marker的话,胶上还看得到marker吗?如果还在胶上,那么蛋白质可能也还在胶上,可以改变
WB只是一种半定量手段,可以用比较两种蛋白表达量,除非你先用标准品跑胶做出一个标准曲线
变性是某些构象和结构发生改变,决定抗体抗原结合的是抗原上的抗原决定簇.抗原决定簇是由6-12氨基酸或碳水基团组成,它可以是由连续序列(蛋白质一级结构)组成或由不连续的蛋白质三维结构组成.在WB中抗体结
erk1/2就表示erk1+erk2分子量分别42,44.也有的抗体只识别其中之一.一般情况下磷酸化不会导致蛋白分子量增加.具体看抗体说明书.CREB容易出两条带原因是CREB和另外一个蛋白同源性太高
将细胞平板取出置于冰上,用PBS洗两次,加入200μl预冷细胞裂解液,短暂孵育后用细胞刮子刮下细胞,将细胞碎片及裂解液移入1.5mlEP管中,冰上孵育20分钟,期间漩涡振荡3次,于4℃离心12000r
分子量很小的多肽不适合,比方说就十几个氨基酸的;当然分子量太大了也不好做,比方说好几百KD的.
首先原理差不多,具体细节差异还是有的.跑DNA的话,可以参见人家做AFLP的protocol,当然也要看你想分离的片断大小咯.两者都要用到丙烯酰胺、甲叉丙烯酰胺、TEMED、APS(10%)但是跑DN
当目的蛋白的分子量大小与选用的内参蛋白分子量大小相差比较明显情况下,可以在转膜后预染,根据蛋白质Marker的大小将膜剪为大分子量和小分子量两部分,使内参蛋白与目的蛋白分开.然后两块膜分别与内参蛋白抗
还是挺贵的,主要需要如下设备:电源(电泳和电转可以通用);电泳槽(随设备会送几盒电泳薄板和厚板);电转槽;以上三个在一起国产的需要1万块,进口的需要几万.最贵的是扫描仪,无论是红外扫描还是化学发光一般
当然是ELISA好了,ELISA在科研上主要用于定量,而Westernblot主要用于定性,当然,根据灰度可以半定量,但这个准确性就差很多了,还有免疫组化,这个是用于定位的.免疫学三大工具,免疫组化、
1.westernblot每孔上样总量15-50ug大部分蛋白能做出来,跟蛋白质表达量、分子量、抗体效价都密切相关.2.组织一般取200mg,匀浆后蛋白常能得到几百ug,跑十块胶足够.
做western,抗体很重要.首先看你要用什么材料做实验,人细胞?还是其他动物的?如果做人细胞,那就要选用鼠抗人,或者兔抗人的抗体.抗原是人的蛋白,抗体来自于鼠或者兔,在有单抗和多抗的情况下,尽量选择
煮沸时间不够使得蛋白质变性不充分或者形成二聚体会导致实验效果不好,煮过头的情况我也没有遇到过(貌似还没有碰到人煮个5-10分钟还会煮成一小时的--|||),不过肯定的是变性已经充分.可以试一试,当然也
30是指内参上样量是30微克的情况下,具体上多少就是多少.灰度值差异很大,所以不能直接用来分析.要分析就是用比值分析.用比值来分析比较下实验组和对照组就可以避免出现绝对灰度值.
多数抗体只识别抗原表面某几个多肽片段,所以它们和抗原的结合不受抗原变性影响,甚至很多时候有些抗体只识别变性的抗原.当然,有些抗体的抗原位点就与蛋白质空间结构有关,抗原变性后就无法和这些抗体结合.通常情
取决于蛋白降解的程度,如果不完全降解,出来的条带肯定会很暗;如果完全降解了,根本就没条带
看你的蛋白样品是纯度很高的单一条带样品还是未经纯化较多杂带的样品.如果是单一条带的样品10微克的上样量就足够了,如果是细胞裂解液这样的样品可以提高一些上样量30~80微克的样子.Western-blo
个人认为:1加样量的变化2一抗二抗的浓度变化以及其洗脱时间的影响3曝光时间(影响最大)