菌落pcr可以但是双酶切验证不了

把分给我把《tellmewhoyouare》

这个是可以的,只是效率不高

1、直接向已灭好菌的平板注入灭好的营养琼脂,可做空白比较2、先给灭好菌的平板中加入1ml灭好菌的0.085%的生理盐水,再向其注入灭好菌的营养琼脂即可

菌落PCR建议,对菌落进行预变性处理,将挑取的单克隆溶于10ul无菌水（1半保存）,分5ul出来进行95度10min变性然后直接放冰上进行预变性处理,相当于提高模板量,提高产量.　　有杂带,建议提高T

如果PCR系统没有问题,很可能是质粒和染色体发生了重组.建议提细菌的genomeDNA做一次PCR.如果是阳性,就说明是这样.另外,还可以另挑几个菌落,重新提质粒扩增.

我觉得用elutionbuffer没太大的影响,如果你非要觉得不好的话,只能在转化一遍重新提质粒或者抽成干粉再加水.我们一般用水就行.实在不行去测序呀.提的质粒和空质粒可以比较,如果你插入的基因足够大

博凌科为生物科技-为你直接挑曲单克隆,一般使用特异引物,在体系中进行PCR即可,细胞热解后DNA释放就能进行PCR扩增~

高手们好.最近做酶切连接转化,最后做鉴定时,以菌落为模板进行PCR时可以见到有目的条带；当把菌落接种到LB液扩菌后,以菌液为模板进行PCR时却什么东东都没有?请问会是什么原因啊?多多指教啊!建议重新以

能确定菌液pcr出来的就是目的条带吗?如果确定,那就是可能质粒抽提和酶切这两步出了问题

M13F(-47)：CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACM13R(-48)：AGCGGATAACAATTTCACACAGGA

不需要.但是菌液PCR需要在开始循环前加热使菌体破裂,DNA变性.所以最好选用HotStartPCR,一举两得.再问：那不是要先提取DNA吗？菌液PCR需要在开始循环前加热使菌体破裂是在pcr仪里直接

利用菌落作为模板进行PCR扩增,验证该菌落里是否带有目标片段.但是由于PCR是一个级联放大的过程,所以即使菌落中不含有目标片段,而是菌落表面沾有一部分之前连接,转化中用的目标DNA,也会导致PCR获得

我本人没具体做过信息学,有个师弟以前做过,就我薄弱的了解,我觉得其实你自己想的方法已经是正道了.由于你现在是时间有限,虽然你调高SAM参数有可能漏掉关键基因,但应该会缩小目的基因范围.用GO分析也是个

可以的.我们验证转化结果时就是根据这个原理的,只不过一般是扩增质粒内的基因,但如果有正确的引物,同样可以扩增基因组上的基因的关于单菌落的处理,一般是把菌落挑到无菌水里,然后沸水煮5min就可以了,目的

因为水中会有一些离子,能导电.所以在手湿的时候一定不要触碰电源线,否则很容易触电的.

可能是菌的基因组DNA,不过基因组DNA是很大的,不只2k还有可能呢,是引物特异性不好,从转入质粒上克隆出了你的目的片段,但从菌基因组或者质粒序列上扩出来一个非特异

为什么不抽基因组?抽出来的模板你可以用好多次.煮沸法模板有效期短,提取的效率也很低下,干扰PCR的杂质也多.就像你PCR失败一样,不一定是模板中没有DNA,也可能是杂质干扰的结果.如果样本只是一个菌,

不正交化用起来不方便,最简单的例子就是求逆,需要计算半天,但正交阵求逆特简单,只需转置一下就可以了.从几何上说,正交基就像一个欧式空间,比如三维空间的x轴,y轴,z轴,没有正交化的就是非欧几何,比如说

建议你购买专门的细菌抽提试剂盒,或者在菌液中加入胰蛋白酶37度消化半小时

有抗性吗?菌扩增,应该是重组质粒有转化进去的.菌液PCR建议：上游引物：选择载体上的一段序列下游引物：选择目的基因的反向引物这种假阳性可能性很小再问：这样不就要重新设计引物了?我最大的问题是明明是从有