细胞培养中细胞传代时胰蛋白酶的用量

10代

原代培养一般培养到十代左右传代培养可以培养至50代,甚至个别细胞发生突变形成类似于癌细胞无线增值原代培养具有两个特点接触抑制和贴壁生长再问：原代培养一般培养到十代左右这里的“代”是指增殖代数，还是传代

第一次作用是洗掉原培养基吸附在细胞上的残留血清等物质,充当洗换液的作用,其实可以用其他溶液替代,比如PBS、hank`s、edta等,因为原培养基中残留血清会钝化胰酶,所以应当洗去；第二次用胰酶的的作

健康细胞的形态饱满,折光性好,生长致密时即可传代.

这个要掌握好时机,在胰酶处理1~2min左右,细胞开始呈现球形但还没有完全脱离培养皿底部时候就弃去胰酶.处理时间不能太长,否则就会损失过多的细胞.

个人认为：胰蛋白酶一种内肽酶,主要作用于精氨酸或赖氨酸羧基端的肽键.因此它可以作用跨膜蛋白和胞外基质中的蛋白质,如：钙粘素、整联蛋白等,胶原蛋白、纤连蛋白、层粘连蛋白等.所以可以使细胞分开.

第一次使用时是将组织分离成单个细胞,再制成悬液培养,即原代培养.第二次使用是处理原代培养瓶中的已经贴壁抑制不再继续生长的细胞.再制成悬液,然后分装到不同的培养瓶中,进行扩大规模的培养.即传代培养.

时间长了的话胰蛋白酶对细胞也是有损害的,胰蛋白酶的处理时间一般控制在一分钟左右,不然所处理的组织细胞就会死亡.

细胞间的物质,生物学名称是细胞间质（intercellularsubstance）.植物细胞间和动物细胞间的细胞间质有所不同.动物细胞由于没有细胞膜,细胞间只要是组织液、糖蛋白、纤维蛋白、胶原蛋白等起

A、胰蛋白酶是消化组织细胞间的物质，A错误；B、胰蛋白酶的作用不是分解培养基的蛋白质，B错误；C、胰蛋白酶的作用是消化组织细胞间的物质，使组织分散成单个细胞，C正确；D、胰蛋白酶是分解细胞外的物质，D

如果需要的细胞量不大,可以扔掉一部分；如果需要很多,就都留着,分到几个瓶子里.以一分三为例：1,去除培养基,PBS洗一遍,胰酶消化,消化完毕后,用完全培养基终止消化,然后将液体平分到3个瓶子中,补适量

首先细胞是不能独立生活的要和周围细胞进行物质交换这种交换大多在组织液中完成还有细胞之间的亲密接触细胞膜上面的传递或识别蛋白质可能会换岗!

细胞分裂10到二十就会编程性死亡,癌细胞除外再问：就是人体细胞也会在分裂10次就死亡吗再答：对基本都是这样体外培养可以一直培养下去，有些可以培养20年，但是细胞都变异了，不是原来的了

D细胞系细胞系（cellline）指原代细胞培养物经首次传代成功后所繁殖的细胞群体.也指可长期连续传代的培养细胞.动物细胞可以传代培养.植物细胞也可以传代培养（如悬浮细胞培养）,但是通常不对植物细胞进

因为传代培养的时候细胞已经癌变了可以无限分裂了这其实就以为这细胞遗传物质已经发生了改变如染色体异常膨大等等.

贴壁细胞细胞在培养瓶长成致密单层后,继续生长的空间不足,培养基中的营养成份也消耗较多,同时代谢废物也有较多堆积,需要分瓶培养,对细胞进行传代扩增.对于贴壁不太紧的细胞如293,可以直接吹散后分瓶.而对

处理一段时间（已有部分分散但未完全脱落）后把大部分胰酶吸出来,剩下的小部分将细胞分散开后直接加入培养基.培养基中含有多种蛋白可以直接中和掉残留胰酶的作用.再问：用什么吸再答：细胞培养有专用的吸管啊。

4倍看密度,10倍看状态,细胞长到覆盖80-90%即可传代,不要长的过密才传,那时细胞状态已经不太好了.细胞传代的方式,如果你在培养瓶里养的话,加入约1ml胰蛋白酶放于培养箱中消化1-2min（不同细

不是不会损伤细胞,而是在特定浓度、一定时间内不会损伤细胞.浓度过大、消化时间过长都会对细胞造成损伤的.

在细胞培养过程中从开始在一个瓶中培养的细胞称为原代细胞,当细胞增殖到一定程度产生接触抑制时,就需要分装到不同瓶是培养,分装后的培养细胞称为传代细胞.