纯化蛋白时,怎么测定PI

.等待高人回答txstbbm(站内联系TA)可能情况：1,ORF不完整或者不是预期的ORF,His没表达出来2,His被空间结构所掩盖,建议变性后再过柱cloudy3197(站内联系TA)同一ls,可

Ni柱中的氯化镍可以与有HIs（组蛋白）标签的蛋白结合,也可以与咪唑结合.步骤是：过柱子前可以选择Ni柱重生,也就是往柱子里倒氯化镍,一个柱长体积就行了,然后平衡柱子,拿你自己的buffer,给蛋白提

植物油体表达体系的研究进展刘昱辉、贾士荣**中国农业科学院生物技术研究所,北京100081摘要：介绍了植物种子中油体和油体蛋白（oleosin）的结构特征及其编码基因的调控,阐述了用植物油体表达体系这

尽量不要这样做,如果实在没有时间做的话还是保存在-80度,具体的储存液配方我忘了,在网上搜搜.建议纯化了就直接测,

mbp前面都会带有一个his标签其实是用his纯化的再问：�����ҵľ�Һ�Ƚ�Ũ��Ȼ�����30�γ�������ϸ��ÿ��20�룩����᲻��ʹ�����ʱ����أ�再答：������

因为蛋白在范馏水中不稳定.也许是进化的关系,蛋白要保证有一定浓度的盐离子才能比较稳定,相互之间不会产生聚集而沉淀.一般如果没有特别的溶液,用PBS就可以了.最好是放四度冰箱,经常换水,尽快透析完.

透析法是利用小分子物质在溶液中可通过半透膜,而大分子物质不能通过半透膜的性质,达到分离的方法.一般透析膜可以自制：动物半透膜如猪、牛的膀胱膜、用水洗净,再以乙醚脱脂,即可供用；羊皮纸膜可将滤纸浸入50

因为在分离纯化过程中,有些酶会死亡,酶多多数是蛋白质,有少数是RNA,就是这个原因

重组蛋白一般用转基因动物的乳腺产生,所以获得的重组蛋白是存在于动物的乳汁当中的.而显然在乳汁中存在大量不同种类的蛋白、糖、脂肪等物质,所以为了获得高纯度的重组蛋白,必须对获得的乳汁进行抽提和纯化.

这是一门很深的学问,除了需要高科技还需要科研专用设备,只是简介,希望对你有帮助,不要上当受骗：酶的分离纯化方法简介生物细胞产生的酶有两类：一类由细胞内产生后分泌到细胞外进行作用的酶,称为细胞外酶.这类

紫外吸收法原理大多数蛋白质由于有酪氨酸和色氨酸的存在,在紫外光280nm有吸收高峰,可以进行蛋白质含量的测定.但是核酸在280nm也有吸收,干扰测定,不过核酸的最大吸收峰在260nm.Warburg等

你是如何知道那条非目的条带也带有组氨酸标签的呢?亲和层析和目的条带一起洗下来的吧?可能是组氨酸丰度较高的杂蛋白,也可能目的蛋白部分降解.要想获得较高纯度的蛋白仅仅用一步亲和层析很难达到.可能试试再加一

现在有酵母基因组,通过比对就可以找到基因了.如果你的氨基酸片段序列是通过质谱之类方法测到的,结果中应该已经给出候选蛋白了.再问：给出一些候选蛋白了，但是那个蛋白也不是我的蛋白啊，再答：这有多种可能，比

蛋白质分离纯化的一般程序可分为以下几个步骤：（一）材料的预处理及细胞破碎分离提纯某一种蛋白质时,首先要把蛋白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态,不丧失活性.所以要采用适当的方法将组织和细胞破

不一定必须加组氨酸标签!你也可以加其他标签,比如：GST等.也可以不加标签,不过要清楚蛋白的性质,比如等电点,根据等电点就可以用离子交换柱进行纯化!

是进入空气引起的吗?那会影响柱效,你的洗脱峰的峰型可能有变化

有his标签么?要不就是beads的事?是你自己装的柱么?多长时间了?还有可能是你的蛋白构象变了,可能把his部分裹在里边了,找找别的条件,或者换NC端.

2%硼酸溶液:2g硼酸溶于98g纯净水中即可混合指示液：（1)1份0.1%甲基红乙醇溶液与5份0.1%溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合.(2)也可用2份0.1%甲基红乙醇溶液与1份0.1%次甲基蓝乙醇溶液临

你的蛋白表达的是可溶还是包涵体?再问：都有，用上清纯的，纯不出来，可能的原因是什么？

既然是已知蛋白,当然是紫外比色测定最为简便可以标准品对照,也可以双波长比色法测定