目的基因与载体转化成功之后要做什么

要构建重组载体的目的就是把目的基因连到载体上,所以最有效的重组DNA是目的基因-载体.目的基因-目的基因和载体-载体都是失败的结果,这种结果的产生相对导致基因-载体的结果产生率下降.一般做重组载体选择

第一个办法,如果你有这个载体的通用引物,可以用这俩通用引物做PCR,然后电泳观察条带的大小,如果条带和你的mRNA的大小相近（应该是略大于mRNA的,因为带有了小部分的载体序列）,那就说明这里边是插入

没有严格的界限的,从100bp--5000bp都可以使用一般的载体的.太长的使用一般载体的话就不太好连了.按现在研究的微生物目的基因很少有超过5000的.植物基因一般比较长,一般都是构建自己的启动子和

目的基因与载体结合需要ATP用PCR技术扩增时也需要用限制酶切割质粒时是切开一个裂口

而当某些病毒做运载体时,这些病毒具备逆转录能力,可以在逆转录酶的作用下,利用自身的RNA,逆转录出相应的DNA,且能使其与宿主细胞的DNA接到一起,并正常表达

设计引物,引物两端带有设计好的酶切位点,找个有目的基因的细胞,提了ran,然后把目的片段p出来,然后跑胶,试剂盒回收目的片段.把载体和目的片段用同样的双酶切,再跑胶,回收切开的载体和目的片段,连接吧.

1、黏性末端DNA的连接：单酶切黏性末端、双酶切黏性末端、不规则黏性末端2、平末端DNA的连接：直接连接法、同聚物加尾法、衔接物连接法、DNA接头连接法、PCR法引入酶切位点的连接1、限制性内切酶链接

解决办法：1、cla1是一个比较不常见的酶,可能酶切体系和ECOR1的缓冲体系不一样,试着分别酶切,就是先切cla1,然后纯化后切ECOR1；或者查找哪个酶的酶切效率高些,那个后切；2、3个小时可能太

不会改变受体的基因的,它只是利用受体的酶等等物质表达出蛋白~

用这两个酶没问题,你要确定几件事：1目的基因和载体都切开了吗?特别是目的基因如果是PCR后直接酶切效率会较低；载体上两个酶切位点连在一起吗?2感受态的效率问题3转化过程对不对,如抗生素加的对不对再问：

载体一般比目的片段要长,为了避免载体自连,所以应使目的片段多些

重组DNA

导入时一回事,表达是另一回事你导入了不一定会表达,导入的目的是使目的基因在受体内表达出来.你必需构建好了载体（终止子,开始子,标记基因.等等）,再植入到受体细胞中,从而表达出目的基因所控制的形状.

不对,DNA连接酶的作用是把目的基因和运载体的粘性末端或平末端的磷酸二酯键连接起来.碱基对的连接不需要没的催化.

这只能说是一种概率问题而已一般来说目的基因和标记基因都是被“捆绑”起来的但是他们互相脱落的概率是1%那么一般来说只要标记基因表达出来了那么目的基因就也是已经进入质粒里面了还有就是你下面那个问题一般这个

不行,是这样的：基因工程中作为载体使用的DNA分子很多都是质粒（plasmid）,即独立于细菌拟核处染色体DNA之外的一种可以自我复制、双链闭环的裸露的DNA分子.是否任何质粒都可以作为基因工程载体使

理论上讲PCR产物可以直接酶切连接反应.但是,以PCR产物酶切的时候没有办法证明双酶切是否成功、彻底（PCR产物会有ployA的存在必须切掉,但是PCR产物和酶切产物大小差别不大）.而以T载体为媒介,

没错,只有用同一种酶处理,载体和目的基因两端才会形成相同的粘性末端,才能把两者连起来.

先用相同的限制性内切酶处理目的基因与载体.再用DNA连接酶连接粘性末端.

目的：表达目标基因,研究其功能与作用机制,包括蛋白质结构、功能等.组成：至少4部分：1.复制功能区,如质粒复制子、染色体同源重组区段、结合转移或其它类似功能区2外源基因克隆位点即多克隆位点3.筛选标记