目的基因与质粒DNA反向连接
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/03/28 23:09:49
使用限制酶.
不是滴~~~~再问:为什么再答:将目的基因与质粒结合为重组质粒是在细胞外进行的,不论的这个重组质粒的作用是什么。再问:那与某种病毒结合为重组DNA是在细胞内进行么,为什么再答:那要看你的这个病毒是否是
不是连接碱基对,而是一个五碳糖和一个磷酸之间形成磷酸二脂键,碱基对互相之间形成氢键,与DNA连接酶无关.
不对在两条核苷酸链之间形成磷酸二酯键,不是氢键
1)利用DNA连接酶便可以将目的基因(已经剪切下来的)连接到质粒载体上2)目的基因的获得:利用限制性内切酶(限制酶).这种酶具有专一性...可以识别特定的回文序列来进行剪切.3)如果你想得到一种基因,
1、黏性末端DNA的连接:单酶切黏性末端、双酶切黏性末端、不规则黏性末端2、平末端DNA的连接:直接连接法、同聚物加尾法、衔接物连接法、DNA接头连接法、PCR法引入酶切位点的连接1、限制性内切酶链接
一般有两种方法,一是用目的基因的特异性引物以重组质粒为模板,进行PCR扩增.看能否出现目的基因的扩增产物.还有一种是将纯化的质粒进行酶切,因为目的基因连接到载体质粒上时两边都带有人工添加的酶切位点,只
具有相同的粘性末端的两条DNA链在连接酶的作用下相连.只有一种酶切时,切出的粘性末端相同,让目的基因和质粒相连接即可,但是由于是混合,连接的结果不尽相同.DNA连接酶将目的基因和质粒粘性末端的3-5磷
“两条目的基因的1处粘性末端不也可以链接吗?”,当然存在这种可能性.但用两种限制性内切酶切割最主要的目的是防止载体切割后的自连,几率不但大,而且可以产生克隆,大量的自连会影响挑选重组的克隆.
就是找到互补的碱基对再问:正向与反向的区别在哪儿呢?再答:不要在意细节
重组DNA
同种酶酶切两端的粘端相同这样子目的基因有可能正向插入载体也可能反向插入(目的片段两个方向都能与载体连接)但是只有一个方向是正确的
基因表达载体上面有基因表达需要的部件,例如35S启动子等等.如果连接反了,当然就不能表达了.再问:为什么就不能倒着翻译呢再答:基因是有方向的。启动子一般在5‘端再问:基因是有方向的,是什么?再答:基因
需要两端都结合首先因为是同一种限制酶切割产生的黏性末端相同在适宜条件下两端都会链接不会出现一端相连而另一端不相连的情况其次细菌质粒上会拼接上目的基因的启动子和终止子必须要两端相连才能表达目的基因并且质
如果是双酶切,而且两个酶切位点不能形成自连,那么插入目的基因也只能获得一种重组质粒.如果是单酶切,或者双酶切的两个酶切位点是同尾酶,那么插入目的基因能获得两种重组质粒.
重组体
目的基因导入可以制备感受态细胞,具体操作可以百度或者看教科书,基本过程就是先低温处理再短暂高温.第二个问题可以通过使用稀有的限制性内切酶切出特异性的黏性末端,可以准确的结合,悬赏分的问题你可以在页面上
不是…一种是需要的产物,一种是切开以后又合上了,等于没切.还有一种是载体载体连接的,就是两个载体连在一起的特殊产物再问:那这种在培养基上也能生长,如何筛选?再答:这种可以用与筛选未被切开的载体相同的方
作为载体的的质粒全部都是经过人工加工的,除了有目的基因外还有启动子,终止子和标记基因,这个应该很好识别的吧.从形状上看的话质粒是小型环状的
跑胶看大小啊,如果是转到了细菌中,就用目的基因的引物做PCR,能P出来的就是