GS115感受态制备

楼上别扯了,那是为了让细胞膜流动性降低,利于DNA的结合,同时使细胞暂停生长,维持在对数生长期的高活性!

1.你到底是感受态没制备好呢?还是转化了,但平板上没克隆呢?2.你转一个有人转成功过的试试,排除感受态和你自己操作是不是有问题?3.你用的是哪种菌啊?LBA4404?GV3101?3抗有没有+错啊?4

孙小刀3个月前觉得大肠杆菌感受态细胞的制备实验简单一般实验室喜欢一下制备大量感受态储备.所以工作量比较大,制作过程到处都有,大多数人也是用化学法做.注意无菌,低温等试验环境,最主要是耐心.

1、将培养液转入离心管中,冰上放置10分钟,然后于4℃下3000g离心10分钟.2、弃去上清,用预冷的0.05mol/L的CaCl2溶液10ml轻轻悬浮细胞,冰上放置15-30分钟后,4℃下3000g

应该是保持内的渗透压,保持细胞的正常形态,因为na和cl是细胞物质运输的重要离子

大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl2法)(1)从新活化的E.coliDH5α菌平板上挑取一单菌落,接种于3～5mlLB液体培养中,37℃振荡培养12h左右,直至对数生长期.将该菌悬液以1:100～1:

一般保存是在-80摄氏度,-20度可以放一段时间,但不能太长.底部有沉淀正常,甘油只是悬浮菌体,而不能溶解,久了就会沉淀下来!转化质粒失败是其他原因,最大可能性是感受态无活性,建议重做感受态,及做即用

问题不大,再用预冷CaCl2悬浮即可.

感受态制备时不是一定要挑单菌落,可以在活化好的平板上划一条线挑菌去小摇.操作时只要保证无菌就可以.另外,补充二楼的转化后挑菌：一定要挑单菌落,而且要利索,不能沾到周围培养基上的空白地方,因为如果不小心

这属于专业问题啦下面的简单方案是Clhen等(1972)所用方法的变通方案,常用于成批制备感受态细菌,这些细菌可使每微克螺旋质粒DNA产生5x106-2x107个转化菌落,这样的转化效率足以满足所有在

对数期,OD=0.4-0.6再问：原因是什么啊？再答：好比人的20岁左右，青壮年啊

1.将冻存的菌种1：100接种于3ml的LB液体培养基中,37℃摇床过夜震荡培养.2.取1ml活化菌种接种于100mlLB培养基中,37℃摇床培养1.5-2h.3.将菌种在冰上放置10min.4℃、4

氯化钙法（CalciumChloride）本方法适用于批量制备大肠杆菌感受态细胞,所得感受态细胞可以获得5x106到2x107转化克隆/微克超螺旋质粒DNA材料（MATERIALS）缓冲液和溶液（Bu

菌种保存采用甘油种结合超低温（-70℃）保存的方法,即用无菌甘油悬浮工程菌,并使甘油终浓度为30%（V/V）,所获物即为工程菌的甘油种.低温可使工程菌的生命活动处于非活跃状态而能较长时间保存细胞活力、

感受态细胞你先用稳定浓度的高纯质粒测一下效率,如果达不到10的5次方就别用了.如果效率挺高有6或7次方而转化子不多,那么就和你构建的质粒有关了.制备感受态,一个要快,二要一直保持细胞在冷冻状态,所有e

原核细胞正常状态不会主动吸收质粒载体,在感受态时细胞膜通透性增加,通过热击或电穿孔技术使载体进入细胞

第一,质粒转化感受态细胞时,只需要一定量的质粒完成转化即可,因此没必要使用高浓度的质粒.第二,质粒是环状的,浓度过高会使得发生断裂,聚集等.第三,浓度过高,溶液比较粘稠,不利于扩散.

1.感受态细胞没有制备好2.重组子整个就没有导入进细胞里再问：还有没有其他原因。。。。不够多~谢谢哈就算是重组子没有进入细胞内，那也应该还有白班，可是我的是什么颜色都没有再答：质粒上的抗生素抗性，没有

除了增加细胞通透性之外,第一次还有洗净之前一步残留的LB液体的作用

感受态不是最适的OD为0.5-0.8么?（转接后培养的）我是按照1:100转接培养,OD值除了和培养时间有关,转速也有影响.一般过夜的话,10个小时左右,转速100如果要早晨转接,下午做,一般5、6个