感受态细胞金属浴热击

在CaCl2溶液中,细菌细胞会发生膨胀,同时Ca2+会使细胞膜磷脂双分子层形成液晶结构,促使细胞外膜与内膜间隙中的部分核酸酶解离开来,离开所在区域,诱导细胞成为感受态细胞同时Ca2+能与加入的DNA分

BL21（DE3）PLySs,转化后37℃慢摇45-60min吧,不加任何抗生素.pET28也没什么特殊tag,没影响的,就是很容易出包涵体的.

1.你到底是感受态没制备好呢?还是转化了,但平板上没克隆呢?2.你转一个有人转成功过的试试,排除感受态和你自己操作是不是有问题?3.你用的是哪种菌啊?LBA4404?GV3101?3抗有没有+错啊?4

若感受态细胞要保存备用,液氮保存最好,其次一70℃,添加20％甘油利于冷冻保存,但添加保护剂对转化率有抑制作用.

孙小刀3个月前觉得大肠杆菌感受态细胞的制备实验简单一般实验室喜欢一下制备大量感受态储备.所以工作量比较大,制作过程到处都有,大多数人也是用化学法做.注意无菌,低温等试验环境,最主要是耐心.

1、将培养液转入离心管中,冰上放置10分钟,然后于4℃下3000g离心10分钟.2、弃去上清,用预冷的0.05mol/L的CaCl2溶液10ml轻轻悬浮细胞,冰上放置15-30分钟后,4℃下3000g

一般保存是在-80摄氏度,-20度可以放一段时间,但不能太长.底部有沉淀正常,甘油只是悬浮菌体,而不能溶解,久了就会沉淀下来!转化质粒失败是其他原因,最大可能性是感受态无活性,建议重做感受态,及做即用

293T,HEK293,AD293等细胞都可以转染用特殊的转染试剂可以直接转染肿瘤细胞,只不过对细胞伤害比较大还可以用病毒,有专门的细胞和体系别的方法我没用过

冰浴过程中,原来加在溶液中的钙离子和细菌细胞膜结合,在低温下形成液晶结构,这样,在42度热激下,这种液晶结构收缩,将细胞膜扯开孔道,使DNA进入细菌细胞中.这就是原理.前面冰浴不清楚,热激我认为是让已

感受态的细胞处于最适摄取和容纳外来DNA的生理状态.再者,将构建好的载体转入感受态细胞进行表达,不仅可以检验重组载体是否构建成功,最主要的是感受态细胞作为重组载体的宿主可以进行后续实验,如蛋白质表达纯

这属于专业问题啦下面的简单方案是Clhen等(1972)所用方法的变通方案,常用于成批制备感受态细菌,这些细菌可使每微克螺旋质粒DNA产生5x106-2x107个转化菌落,这样的转化效率足以满足所有在

准确来说是：钙离子转化法

完全可以,我们以前就是放液氮里的～

1.将冻存的菌种1：100接种于3ml的LB液体培养基中,37℃摇床过夜震荡培养.2.取1ml活化菌种接种于100mlLB培养基中,37℃摇床培养1.5-2h.3.将菌种在冰上放置10min.4℃、4

要看你做的是什么了.大肠杆菌感受态根据用处的不同,也有很多种类,比如比较常见的TOP10、DH5α,质粒保存较为稳定的JM109、STBL3,表达所用的BL21等等.除此之外,植物基因转化常用土壤农杆

冰浴是为了质粒附着在菌体表面,热击是打开通道让质粒进入,觉得LZ的做法影响不大,不过要实际验证

感受态细胞你先用稳定浓度的高纯质粒测一下效率,如果达不到10的5次方就别用了.如果效率挺高有6或7次方而转化子不多,那么就和你构建的质粒有关了.制备感受态,一个要快,二要一直保持细胞在冷冻状态,所有e

影响感受态细胞转化效率的因素及实际操作过程中应注意的事项：1．细菌的生长状态：实验中应密切注视细菌的生长状态和密度,尽量使用对数生长期的细胞（一般通过检测OD600来控制.DH5α菌株OD600为0.

第一,质粒转化感受态细胞时,只需要一定量的质粒完成转化即可,因此没必要使用高浓度的质粒.第二,质粒是环状的,浓度过高会使得发生断裂,聚集等.第三,浓度过高,溶液比较粘稠,不利于扩散.

对照组被污染了,或者氨苄有问题,或者在配制培养基的时候在培养基还没冷却的时候就加了氨苄.其实大肠杆菌感受态可以买的,又不贵.自己做太麻烦了.我已经说了啊,可能是对照的大肠杆菌被污染了,或者这些大肠杆菌