巢氏 PCR引物设计

Oligodt不需要设计,用试剂盒里面的就行.如果你RT的引物想用自己的,那你需要扩增的基因序列应该是明确的吧.RT的时候'引物没太多的选择性,mRNA序列跟反义链配对,因此RT的引物要根据正义链（就

完全可以,PCR长度从50bp到数百都可以,不止局限于150-300个碱基对.楼上说的有道理,但是有一点要注意,最好计算一下扩增片段的Tm值,这样做溶解曲线的时候,光有一个峰还不够,而且得到的TM和你

引物的设计一般要考虑以下几个问题：1.长度,至少要16bp,通常为18-30bp2.解链温度（Tm值）3.避免引物内部或引物之间存在互补序列（3个碱基）,从而减少引物二聚体的形成以及引物内部二级结构的

请用primerexpress设计就行.你想去找非常保守的区域设计引物?可以,那你把这个物种的所有亚种的此段DNA序列做一个保守型分析就行.一般来说clustalX就可以了.再问：ClustalX排列

你查到人类和小鼠该基因对应的mRNA序列,进行比对,找出高度同源的一段,下面就是常规的real-timePCR引物设计步骤了,你知道的吧?

不用那么复杂网上那都是扯淡的主要是这么几点注意的：1.碱基组成,GC的含量2.引物长度3.不能有反向重复和自身互补序列4.Tm值5.3端最好为G或C等等设计时最好用软件弄一下不用面面俱到没有太大问题就

用PP5.0或oligo软件.网上有很多说明书的,操作十分简单再问：等于白说

这是基础知识问题,请抬头,看本页面的导航栏,找到专题,点击进去有个引物设计专题,把上面的资料都研究透彻了,如果还不会再问.同时你也可以去生物秀论坛pcr实验版块看看,相关文章很多.………………

引物可以通过一些软件设计,比如primer5,但是还需要注意一些细节问题.比如1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计.DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的.在NCBI上搜索不同物种的同

如果你测定的基因序列未知,可以用同源基因或者别的物种的同类基因序列来设计引物,进行PCR,看看是否能够扩增出产物,并对产物进行确认,判断扩增的特异性.如果确认无误,就可以进行荧光定量PCR.再问：我想

若是根据已知序列扩增未知物种的相应序列,可以根据先根据已知序列进行Blast搜索,发现其他同源序列,保存后进行比对,找出其中较保守区域,并根据Primer或Oligo等软件对某条序列进行分析,搜索其中

PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列.因此,引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否.要设计引物首先要找到DNA序列的保守区.同时应预测将要扩增的片段

一般要20个碱基的长度,一对,要防止形成发夹.

用primerpremie

一、可以使用oligo6或者primer5等软件设计.用这些软件选择引物,主要就是看引物的稳定性,形成二聚体的可能性,退火温度等等参数.二、如果你的序列同源性不高,GC含量也还可以的话,可以使用一些经

NCBI有免费的设计软件非常好用,权威把你的序列贴到最上方的空格就可以了,开始的时候,所有的参数都用系统的默认值就可以,不需要修改.

跟一般的PCR一样哇,PrimerPremier、Oligo都可以哦.

第一次的引物再用,效果不好,酶需要一些额外片段来结合在模板上,所以第二对引物要靠里.引物不同,能增加特异性,这也是巢式PCR的意义所在啦.看到图片会更好理解哈:hand:

普通PCR规则：1、18-25bp；2、Tm值在45-60；3、2个引物之间没有超过5bp的互补序列；4、CG%在40-60%；5、避免连续出现3个以上的CCC或GGG；6、不要迷信百度.

PCR扩增引物要在目的片段两测150bp位置为宜,这样设计的原因是既可以有效控制扩增产物的大小,因为太长的片读一个测序反应无法得到全场序列,又可以给测序设计内引物留出足够的空间.由PCR特性决定的,不