含有一段人工合成目的基因的质粒,有目的基因的上下游引物,最终的pcr产物是
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/05/14 05:35:52
第一个办法,如果你有这个载体的通用引物,可以用这俩通用引物做PCR,然后电泳观察条带的大小,如果条带和你的mRNA的大小相近(应该是略大于mRNA的,因为带有了小部分的载体序列),那就说明这里边是插入
没有严格的界限的,从100bp--5000bp都可以使用一般的载体的.太长的使用一般载体的话就不太好连了.按现在研究的微生物目的基因很少有超过5000的.植物基因一般比较长,一般都是构建自己的启动子和
这句话不对,限制性内切酶会产生一个末端,末端有粘端与平端之分.而连接时,需要质粒与外源基因的DNA酶切位点切出来的末端完全匹配.这就意味着,连接只需要酶切出来的粘端相同即可.当然,同一种酶的粘端肯定是
首先我说一下,质粒上并不是“抗生素基因”,而是“抗抗生素基因”,此种基因编码一些专一性的酶催化抗生素分解,比如抗青霉素的酶就是“贝塔内酰胺酶”,催化青霉素的内酰胺环开环.所以只要菌体内有这种带上了抗抗
具有相同的粘性末端的两条DNA链在连接酶的作用下相连.只有一种酶切时,切出的粘性末端相同,让目的基因和质粒相连接即可,但是由于是混合,连接的结果不尽相同.DNA连接酶将目的基因和质粒粘性末端的3-5磷
筛选用的.因为基因重组到质粒后需要导入受体细胞进行表达.质粒中有一些是重组的有一些是没有切开或者重组不成功的重新变回原来的质粒.那么筛选的时候如果细菌长出来其中一个抗性另一个不抗性那么可以说明中间被插
我看是要用氨苄霉素进行筛选.楼主说的两点都对,所以因为第2点所说的原因,用四环素肯定会杀死你想要的细胞滴.至于第一点所担心的纯度问题,当然也是可能有某些细胞带有空质粒啦.这只能够靠前期插入(ligat
因为人工合成的DNA是不需要切割的.合成人工的基因是依靠对目的蛋白质的功能预测,然后依照密码子规律,列出相应的RNA链,再反推出DNA的一条链的碱基排列顺序,然后依靠碱基互补配对原则推出DNA的另一条
这个就要看标志基因是在细菌质粒上,还是在目的基因上了.可能不同的教材,是从不同的角度出发的.
你说的一点都没错.所以标记基因作用的另外一个说法更准确:“筛选含有目的基因的细胞”,当然这个筛选也只是初步筛选,要想确认是否含有目的基因,要用“DNA分子杂交技术”.
质粒是细菌细胞内一种自我复制的环状双链DNA分子,能稳定地独立存在于染色体外,并传递到子代,一般不整合到宿主染色体上.现在常用的质粒大多数是经过改造或人工构建的,常含抗生素抗性基因,是重组DNA技术中
重组体
大肠杆菌的天然质粒有ColE1、RSF2124、pSC101.第一个质粒有大肠杆菌素E1合成基因;第二个是第一个的派生质粒,带有一个编码氨苄青霉素抗性基因的转位子;第三个有四环素抗性基因(手机字母不好
不是…一种是需要的产物,一种是切开以后又合上了,等于没切.还有一种是载体载体连接的,就是两个载体连在一起的特殊产物再问:那这种在培养基上也能生长,如何筛选?再答:这种可以用与筛选未被切开的载体相同的方
选择合适的表达质粒如pET系列,再选择合适的两个酶切位点,先从T载体上切下基因,与酶切好的表达质粒相连,就好了
一条途径是以目的基因转录成的信使RNA为模版,反转录成互补的单链DNA,然后在酶的作用下合成双链DNA,从而获得所需要的基因.另一条途径是根据已知的蛋白质的氨基酸序列,推测出相应的信使RNA序列,然后
这个技术叫GeneSynthesis.现在已经可以商业化合成了,只要提供一段序列(可以任意设计),厂家就可以照样合成出来.不需要进行任何PCR.这里给个厂家的连接
人工合成的基因是通过对蛋白质所含氨基酸的密码子序列进行分析再逆转录得到的,连真正的碱基序列也不算.所以,人工合成的基因不含非编码区.而且要对逆转录得到的基因继续处理,才会产生能在体内稳定复制的基因.
跑胶看大小啊,如果是转到了细菌中,就用目的基因的引物做PCR,能P出来的就是