做实时PCR一定要提RNA来逆转录再做吗?为什么不能直接提DNA做?

需要试剂盒么,我们用天根的mixture和sybergreen,引物自己网上找别人用过的,反转录cDNA

1做标曲才可以算出这对引物的扩增效率（其斜率）,方便用pfaffl方法来进行相对定量（得到的结果相对精确一点）,否则只能默认扩增效率为2,用2^-ddCt(Livak)法来计算2做标曲才可以绝对定量.

小说的文字有很多都不是最准确的,既然上面写的是“实时”,那么就应该是实时荧光定量PCR,否则普通PCR做不到“实时”.所以是一回事.

PCR-DGGE就是普通的凝胶电泳,PCR之后分离DNA,检测不同DNA分子中的任何一种单碱基的替代、移码突变以及少于10个碱基的缺失突变.实时荧光定量PCR是为了检测模板中某基因的的含量---cop

RNA提取,一般是500块钱50个样品realtime-pcr看不同公司,rakara打对折时候是1500元200次,体系减小可以做500次,平时是3000元,带有逆转录试剂盒

在百度知道里怎么会问这个问题?都有专业的书籍或者文献可供参考的.不同的试剂公司还有荧光定量的培训PPT,你需要的话我可以给你发过去.

你可以联找威斯腾生物,把你的实验内容和要求告诉他们,那边会给你设计分析,公司质量和服务都很不错.

说一下自己做实验时候用到的东西,血液提取mRNA还是采用试剂盒来提取,手工法极不推荐,但是试剂盒还是蛮贵的,可以问一下天根公司,价格还算可意,效果也不错.逆转录过程可以用Fermentas一款逆转录试

最好还是在冰上做啦,一次两次没有问题,久了多了可能问题就出来了一般用的是灭菌的双蒸水保证引物的终浓度就可以.都是用水稀释的,没啥差别

你说的TL988是国产的天隆PCR仪器吧?那个仪器很烂的,千万不要买,建议买ABI7500,或者安捷伦的MXP3005,或者伯乐的,eppendorf的,都可以,基本上都是96孔4～5通道的.现在36

用TAKARA的吧,相对便宜

用灭菌DEPC水以保证没有RNAse降解你的模板RNA,不要用含有EDTA的buffer,包括TEbuffer.EDTA会络合掉镁离子,从而干扰PCR反应.

一般的RT-PCR引物是不能用来做是实时荧光定量的的引物的,但是你可以设计出兼顾二者的引物,除了要注意一般引物设计的原则外,愚见认为还要注意下两个问题：

我们课题组和威斯腾生物合作比较多,有的实验室条件有限做不了的实验,我们都是联系他们帮我做,他们有自己的实验室,还可以全程参与,这样也对实验结果放心些.

你最终写文章要用的数据必须要做重复.但如果只是初期筛引物或者你只是想自己做个预实验看看情况,你做1孔或两孔也不是不行.

1.其实反转录要求不是很高,所有器具消毒操作带手套口罩就行,没必要加RNaseInhibitor2.OD260/280实际上反应的是蛋白质杂质的比例,可以间接的反应有没有RNA酶污染,所以这个比值低了

做什么定量半定量都是一样的.样品最好有相同的处理.组织重量上最好接近,不用完全一样.因为抽了RNA之后还要定量,我的经验是取2500ng的RNA量做反转,之后就一样了

试剂药品无非就是酶BUFFER可以认为基本无毒根据不同方法进行荧光定量PCR你可能会用到SYBRGreenI或者带有荧光基团的探针探针本身是无毒的(DNA),荧光基团只要不进入你的身体里问题也不大(做

1.按照正确的开关机顺序操作,有助于延长仪器的使用寿命,减少仪器出故障的频率.开机顺序：先开电脑,待电脑完全启动后再开启定量PCR仪主机,等主机面板上的绿灯亮后即可打开定量PCR的收集软件,进行实验.

看你要做什么了.做基因转录,那只有做cDNA,向楼上说的那样.如果是做染色体定量,那就是用DNA.比如常见的DNA病毒定量,直接提DNA来做.不过RNA病毒定量就要用cDNA了